特别提示:包括丝状真菌线粒体蛋白提取试剂盒在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床YL及其他非科研用途!
产品名称:丝状真菌线粒体蛋白提取试剂盒
英文名称:Reagents for mitochondrial protein extraction from filamentous fungi
产品货号:HR8088
产品规格:50T|100T
线粒体(mitochondria)是真核细胞中产生能量的重要细胞器。细胞中的能源物质-脂肪、糖、部分氨基酸在此进行zuì终的氧化,并通过偶联磷酸化生成ATP,供给细胞生理活动之需。
对线粒体结构与功能的研究通常是在离体的线粒体上进行的,本试剂盒用简便快速的方法即可在1小时内提取得到线粒体蛋白。
储存条件:2-8℃保存。
有效期:一年。
注意事项:
●本试剂盒仅供科学研究使用,不可用于诊断或ZL。
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖和管内壁上的液体离心至管底,避免开盖时试剂损失。
● 禁止与其他品Pai的试剂混用,否则会影响使用效果。
● zuì好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿,可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
● 避免皮肤或粘膜与试剂接触。
试剂盒以外自备试剂和仪器:
● 移液器、吸头 ●离心机及离心管 ● 涡旋振荡器 ●冰箱,冰盒
使用方法:
使用注意事项:
● 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
● 实验过程中的所有试剂须预冷;所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
1.取500mg-1g 丝状真菌样本,采用以下其中一种方法处理:
I、加入3ml 提取液后用匀浆机/Dounce匀浆器匀浆。
II、置于研钵中用液氮研磨,研磨后加入3ml冷的提取液。
III、加入3ml 提取液直接置冰上研磨。
2.将匀浆用250 目细胞筛或3 层纱布或脱脂棉过滤。或者在4℃,100×g 力条件下离心1分钟,收集上清,弃沉淀。
3.将滤液700g离心10分钟,取上清。
4.将上清11000g离心20分钟。
5.弃上清,留沉淀。
6.每200μl蛋白提取液B中加入1μl蛋白酶YZ剂混合物混匀。用200-400μl蛋白提取液B重悬沉淀,在4℃条件下振荡20分钟,至无明显沉淀。
7.在4℃,14000g条件下离心15分钟。
8.快速将上清吸入另一预冷的干净离心管,即可得到真菌线粒体蛋白。
9.将上述蛋白提取物定量①后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验②。
【注】
① 建议用BCA 法进行蛋白定量。
② 蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉,不要被细菌污染。
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