HR8038 植物蛋白提取试剂盒(无去垢剂)

特别提示：包括植物蛋白提取试剂盒(无去垢剂)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床YL及其他非科研用途！

产品名称：植物蛋白提取试剂盒(无去垢剂)

英文名称：Plant protein extraction kit (no descaling agent)

产品货号：HR8038

产品规格：50T|100T



植物蛋白提取试剂盒(无去垢剂组份)提供全套试剂，适用于从各种植物细胞、组织样本中提取总蛋白。提取过程简单方便。

本试剂盒的所有组份均不含去垢剂成分，zuì后得到的蛋白样品的成分对NI 柱纯化、分子筛、离子交换、亲和纯化等下游应用没有明显影响。

本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解细胞膜组份，包括细胞质膜、核膜和各种细胞器膜。本试剂盒含有的蛋白酶YZ剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。

本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。

本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。

本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。

本试剂盒提取的蛋白样本含有高浓度的盐成分，不可直接用于2D电泳，如下游实验需要直接用于等电聚焦、双向电泳，请使用我公司其他货号的试剂盒。也可以将zuì后样品除盐后再用于2D电泳，用脱盐柱脱盐处理(相关产品HR0389)。

我公司可以提供针对动物细胞、组织、植物、真菌、酵母、微生物、液体、土壤等不同样本的蛋白提取试剂盒，包含用于非双向电泳和双向电泳等不同下游应用的试剂盒以及含去垢剂成分和不含去污剂成分的蛋白提取试剂盒，专用于蛋白质谱检测的试剂盒等总计300多种蛋白提取试剂盒可供选择。我公司还可以提供针对动物、植物等不同样本的细胞核、线粒体、溶酶体、叶绿体等不同细胞器的提取试剂盒。



储存条件：蛋白提取液2-8℃保存；蛋白稳定剂2-8℃保存；蛋白酶YZ剂-20℃保存。

【注】：

●蛋白酶YZ剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。

●蛋白酶YZ剂在2-8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

有效期：一年。



※ ※ ※ 使用前请仔细阅读产品说明书 ※ ※ ※

使用限制：本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或ZL。

产品更新：我公司会更新或升级产品，以优化和增强其使用性能，产品说明书会进行相应的版本更新。使用产品时，请参照随产品附带的说明书，不要参照网上下载的说明书，可能是不同的版本。需要zuì新电子版说明书时可以在收到产品后发邮件索取。

使用安全：使用时需要合适的实验室外套，一次性手套。避免皮肤或粘膜与试剂接触。如果试剂不小心接触皮肤或眼睛，应立即用水冲洗。



注意事项：

1．正式实验前请选取几个样本做预实验，以优化实验条件，取得zuì佳实验效果。

2．螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。

3．禁止与其他品Pai的试剂混用，否则会影响使用效果。

4．样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。

5．zuì好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。

6．实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。



产品特点：

1．使用方便，从细胞，组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。

2．提取过程简单方便，将蛋白提取的时间缩短至1小时。

3．含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。

4．紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。

5．总蛋白提取液含多种有效成分，可以充分释放胞浆蛋白、核蛋白和膜蛋白，又可结合释出的蛋白防止沉淀。

6．蛋白酶YZ剂YZ了蛋白的降解，蛋白酶YZ剂配方优化。蛋白酶YZ剂混合物包含6种独立的蛋白酶YZ剂AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一种YZ剂可特异性YZ某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以YZ几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

试剂盒以外自备仪器和试剂耗材：

仪器：

●离心机● 振荡器● 涡旋混匀器● 移液器●冰箱●冰盒

试剂：

● PBS(pH7.4，实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液(1×))phosphate buffer saline/Dμlbecco’s PBS：约含8mM Na2HPO4、2mM KH2PO4、137mM NaCl和3mM KCl)

耗材：

●离心管● 吸头



使用方法：



使用注意事项：

● 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

● 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。

●蛋白酶YZ剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。

● 下游用于双向电泳、蛋白质谱等应用前需要进行脱盐处理，可以用脱盐柱脱盐或透析脱盐。

植物组织样本：

1．提取液准备：

每500μl冷的提取液A中加入4μl蛋白稳定剂和2μl蛋白酶YZ剂，混匀后置冰上备用。

【注】：

● 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶YZ剂混合物不可以一次全部加入提取液。

● 加过蛋白酶YZ剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶YZ剂。

2．取洗净擦干后并去除叶梗和粗脉的100-200mg 鲜嫩植物组织样本用手术剪刀尽可能剪碎，加入500μl提取液A 后用匀浆机/匀浆器充分匀浆。

【注】：

● 也可置于研钵中用液氮研磨，研磨后加入500μl冷的提取液A。

● 没有液氮研磨条件，也可加入500μl提取液A 直接置冰上研磨。

3．将匀浆液吸入一个预冷的干净离心管中在4℃振荡30分钟-1小时。

【注】：

● 使用振荡器/摇床的较低转速，提取液能轻微晃动即可。

● 没有振荡条件也可不振荡，置4℃静置1小时，中间每隔10分钟充分混匀一次。

4.在4℃，12000g条件下离心10-15分钟。

5．将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到植物总蛋白。

6．上述蛋白提取物请分装后于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

【注】：

● 建议用BCA 法进行蛋白定量。相关产品：HR0329。

●蛋白样品－80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。

细胞样本：

1．提取液准备：

每500μl冷的提取液A中加入4μl蛋白稳定剂和2μl蛋白酶YZ剂，混匀后置冰上备用。

【注】：

● 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶YZ剂混合物不可以一次全部加入提取液。

● 加过蛋白酶YZ剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶YZ剂。

2.细胞用PBS 洗涤2次。

3．加入细胞体积5-10倍体积的蛋白提取液，振荡1小时。

4.在4℃，12000g条件下离心10-15分钟。

5．将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到总蛋白。

6．上述蛋白提取物请分装后于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

冻存样本：

1．冻存组织样本参照上述组织样本步骤操作。

2．冻存细胞样本中直接加入5-10倍体积的蛋白提取液，振荡30分钟。

3.在4℃，12000g条件下离心15分钟。

4．将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到总蛋白。

5．上述蛋白提取物请分装后于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

常见问题分析：

●蛋白浓度低？

处理部分组织样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。zuì好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。

●用什么方法定量蛋白？

建议用BCA 法。不适合用Bradford 法，因为试剂A中含有干扰Bradford 法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford 法定量。

● 提取时出现胶状沉淀？

蛋白提取液处理产物中有时会出现少量透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。不检测和基因组DNA 结合特别紧密的特定蛋白的情况下，可以直接离心取上清进行后续实验即可；如果需要检测和基因组结合特别紧密的核蛋白，则可以通过超声处理，300w/10秒间隔10秒，超声3分钟，随后

离心取上清用于后续实验。

● 提取的蛋白具有活性吗？

本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。



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货号	名称	规格
WE0262	哺乳动物蛋白抽提试剂盒	25次|100次
SNM418	全蛋白提取试剂盒	50T
KFS070	10×WB洗涤液(TBS)	100ml
SY0356	4×Tris-HCl-SDS浓缩胶缓冲液，pH6.8	250ml
SY0368	0.5 M Tris-HCl缓冲液(pH 6.8)(无菌)	250ml
QN1151	AEC显色试剂盒(20×)	1ml|10ml
QN1171	硝酸纤维素膜(NC膜)(0.45um)	30cm*3m

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名称：强RIPA裂解液

货号：BTN131006

规格：250mL

RIPA裂解液是一种传统的细胞组织快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等实验。本产品裂解强度较强，对膜蛋白、胞浆蛋白、核蛋白、胞浆磷酸化蛋白和各种转录因子均有很好的效果，本产品含有各种蛋白酶和磷酸蛋白酶YZ剂，能有效防止各种蛋白酶对目的蛋白的降解。我公司各种RIPA裂解液产品特点见下表：

产品名称	RIPA裂解液(强)	RIPA裂解液(中)	RIPA裂解液(弱)
有效裂解成分	1% Triton X-100,1% deoxycholate,0.1% SDS	1% NP-40，0.5% deoxycholate,0.1% SDS	1% NP-40，0.25% deoxycholate
裂解强度	强	中	温和
对膜蛋白的提取	很好	较好	一般
对胞浆蛋白的提取	很好	很好	很好
对核蛋白的提取	很好	较好	较好
胞浆磷酸化蛋白提取	很好	很好	很好
细胞核转录因子提取	很好	很好	很好
含蛋白酶YZ剂	是	是	是
含磷酸酯酶YZ剂	是	是	是
主要用途	WB,IP	WB,IP	WB,IP,co-IP

储存条件：低温运输，4℃保存，有效期一年。



使用方法：



对于培养细胞样品：

1. 融解RIPA裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的zuì终浓度为1mM。

2. 裂解细胞

2.1 对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。

2.2 对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。

3. 充分裂解后，10000-14000g离心3～5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。

注意：通常6孔板每孔细胞加入150微升裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200微升或250微升。



对于组织样品：

1. 把组织剪切成细小的碎片。

2. 融解RIPA裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的zuì终浓度为1mM。

3. 按照每20毫克组织加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。)

4. 用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。

5. 充分裂解后，10000-14000g离心3～5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。

6. 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。

注意：RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清用于后续实验；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子，例如NF-kappaB、p53等时，通常不必进行超声处理，就可以检测到这些转录因子。



备注：

1.为取得zuì佳的使用效果，尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。

2.裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。

3.用RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品，建议使用BCA蛋白浓度测定试剂盒，不建议使用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。