QN2052 革兰氏阳性菌基因组DNA提取试剂

特别提示：包括革兰氏阳性菌基因组DNA提取试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床YL及其他非科研用途！

产品名称：革兰氏阳性菌基因组DNA提取试剂盒

英文名称：Genomic DNA extraction kit for Gram-positive bacteria

产品货号：QN2052

产品规格：50T|100T



本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统，提取革兰氏阳性菌基因组DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料，能够GX专一吸附DNA，可zuì大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。提取的基因组DNA片段大，纯度高，质量稳定可靠。使用本试剂盒提取的基因组DNA可用于各种常规操作，包括酶切、 PCR、文库构建、Southern杂交等实验。



试剂盒组成：

组分	D1650-50T	D1650-100T
溶菌酶	3ml	5.5ml
RNase A	1m1	1m1×2
蛋白酶K	1ml	1m1×2
溶液A	10ml	20ml
溶液B	10ml	20ml
漂洗液	15m1	15ml×2
洗脱液	15m1	30m1
吸附柱	50个	100个
收集管	50个	100个
说明书	1份	1份

储存条件：15～25℃干燥保存，有效期12个月，2℃-8℃保存时间更长。



操作步骤：

使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶体上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

1．取细菌培养液1ml，12000rpm 离心1min.，尽量吸除上清。

2．向菌体中加入200μl终浓度为20mg/ml的溶菌酶，用溶菌酶干粉加入缓冲液20mM Tris(pH8.0)；2mM Na2-EDTA；1.2% Triton X-100，37℃处理30min以上。(如果需要去除RNA，可加入20μl RNase A,100mg/ml溶液)

3．向菌体中加入200μl溶液A，振荡或用移液器吹打使菌体充分悬浮，向悬浮液中加入20μl的RNase A(10mg/ml)和50ul溶菌酶，充分颠倒混匀，室温放置30～60min。(可选作，如做第3步操作，可以将第2步离心后的沉淀用于后续实验)。

4．向管中加入20μl的蛋白酶K(10mg/ml)，充分混匀，55℃消化30～60min，消化期间可颠倒离心管混匀数次，直至样品消化完全为止，此时可见菌液呈清亮粘稠状。

5．向管中加入200μl溶液B，充分颠倒混匀，如出现白色沉淀，可于75℃放置15～30min，沉淀即会消失，不影响后续实验。如果溶液未变清亮，说明样品消化不彻底，可能会导致 DNA的提取量以及纯度降低，还可能堵塞吸附柱。

6．向管中加入200μl无水乙醇，充分混匀，此时还可能会出现絮状沉淀，不影响DNA的提取，可将溶液和絮状沉淀都加入到吸附柱中，静置2min。

7．12000rpm离心2min. 弃废液，将吸附柱放入收集管中。

8．向吸附柱中加入600μl漂洗液(使用前请先检查是否己加入无水乙醇)。12000rpm 离心1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。

9．向吸附柱中加入600μl漂洗液，12000rpm离心lmin，弃废液，将吸附柱放入收集管中。

10．12000rpm离心2min，将吸附柱敞口置于室温或50℃温箱放置数分钟，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，否则漂洗液中的乙醇会影响后续实验如酶切、PCR等。

11．将吸附柱放入一个干净的离心管中，向吸附膜ZY悬空滴加 50～200μl经65℃水浴预热的洗脱液，室温放置5min，12000rpm离心1min。

12．离心所得洗脱液再加入吸附柱中，室温放置2min，12000rpm 离心2min，即可得到高质量的细菌基因组DNA。



注意事项:

1．样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量下降。

2．若试剂盒中的溶液出现沉淀，可在65℃水浴中重新溶解后再使用，不影响提取效果。

3．如果实验中的离心步骤出现柱子堵塞的情况，可适当延长离心时间。

4．洗脱缓冲液的体积zuì好不少于50μl，体积过小会影响回收效率；洗脱液的pH值对洗脱效率也有影响，若需要用水做洗脱液应保证其pH值在8.0左右(可用NaOH将水的pH值调至此范围)，pH值低于7.0会降低洗脱效率。DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。

5．DNA浓度及纯度检测：得到的基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。DNA应在OD260处有显著吸收峰，OD260值为1.0相当于大约50μg/ml双链DNA、40μg/ml单链DNA。OD260/0D280比值应为1.7～1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用去离子水，比值会偏低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。



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名称：柱式拭子DNA提取试剂盒

货号：BTN80801

规格：50次

拭子是一种常用的的生物样品取材方法，可以用于PCR等分子生物学分析。拭子取材的主要特点是快捷和非介入性(不会对对象造成伤害)，尤其适用于大规模筛查取样和特殊群体(如儿童)和组织(如口腔)的取样。市场上专门用于拭子样品DNA提取的产品不多，为此我司开发了本产品。



产品特点：

1.快速柱式操作，整个过程只需要十分钟。

2. DNA纯度高，OD比值一般在1.8左右。

3. 回收率高，一般在0.5μg DNA/拭子左右。

4. 环保安全，不需要使用任何有毒的试剂(包括酚和氯fǎng)。

5. 提取的DNA能够用于电泳、酶切、杂交检测和PCR。

6. 本产品可以跟拭子保存液(BTN80802)结合使用，用于提取保存的样品。



试剂盒组成：

成分	规格
无菌拭子	50只
通用上柱液	25ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
DNA洗脱液	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。



使用方法：

1. 将拭子涂抹面颊的口腔内表面约十次，放入加有0.5mL通用上柱液的1.5mL塑料离心管中。

2. 剪去口腔拭子柄部，留药棉头于离心管中，盖上离心盖后振荡一分钟。

3. 将上清液(约0.4mL)和拭子一起全部转移到离心吸附柱中。

4. 12000rpm离心一分钟后弃穿透液和拭子。

5.在离心吸附柱中加入700μl的通用洗柱液，室温12000rpm离心1分钟，弃收集管中废液。

6.室温12000rpm离心1分钟，甩干残留液体。此步不能省略，否则残留乙醇会影响DNA的后续使用(如DNA上样时不能沉淀到加样孔中)。

7. 将离心吸附柱置于一个新的1.5mL塑料离心管(自备)中，加入30-50μl DNA洗脱液，室温放置2分钟。

8.室温12000rpm离心1分钟，离心管底溶液即DNA。



附:从非冻型拭子DNA保存液保存的拭子中提取DNA(仅供参考，本产品不提供所需试剂，如果需要请另行购买)

1. 将0.5mL非冻型拭子DNA保存液加入到自备的1.5mL塑料离心管中待用。

2. 用拭子涂抹口腔内表面、鼻腔表面或其他待取样器管的表面约十次。

3. 将拭子放入到加有的1.5mL塑料离心管中，剪去专用拭子柄部，留药棉头于离心管中，盖上离心管管盖后即可长期保存、运输。

4. 保存或运输结束后将药棉头挤干溶液后取出。

5.在剩下的溶液(约0.5mL)中加入1mL通用上柱液，颠倒混匀。

6. 先取0.75mL混合液到离心吸附柱中，室温12000rpm离心1分钟后弃穿透液，然后在将剩下的0.75mL混合液到离心吸附柱中，室温12000rpm离心1分钟后弃穿透液。

7.其余操作接柱式拭子DNA提取试剂盒操作(见上)的第5步。



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