SYA126 卵形疟原虫单重荧光PCR检测试剂

特别提示：包括卵形疟原虫单重荧光PCR检测试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床YL及其他非科研用途！

产品名称：卵形疟原虫单重荧光PCR检测试剂盒

产品货号：SYA126

产品规格：48次/盒



一、简介：

本试剂盒用一对卵形疟原虫特异性引物，结合一条特异性荧光探针，用荧光PCR探针技术进行卵形疟原虫的检测。



二、用途：

本试剂盒可用于卵形疟原虫检测鉴定及突发公共卫生事件的处置，还可用于卵形疟原虫的环境监测、卫生检疫及感染的辅助诊断，其检测结果仅供临床参考。



三、试剂盒组成：(48T)

组份 数量 规格

卵形疟原虫荧光PCR反应液(qPCR MIX) 1管 672μL/管

DNA抽提液(DNA Extraction) 2管 1.5mL/管

酶混合物(DNA Polymerase MIX) 1管 48μL/管

阴性对照(NTC) 1管 50μL/管

卵形疟原虫阳性对照(PTC) 1管 50μL/管



四、荧光PCR 仪器适用范围

ABI 系列，Bio-Rad 系列，Roche 系列等荧光定量PCR 检测仪等。



五、储存条件及有效期：

本试剂盒于-20℃保存，避免反复冻融，有效期为6 个月。



六、实验操作步骤

6.1 标本采集

血液： 用一次性无菌5ml 注射器抽取疑似人或动物血3-5ml，置于枸橼酸钠或EDTA2Na 抗凝管中，摇匀送检。

肺脏等组织：取上述组织1g左右，置于1.5ml洁净EP管中送检。

乳液、体液等标本：取相应标本3-5ml，转至1.5ml洁净EP管中送检。

6.2 DNA提取

可采用PCR试剂盒配备的DNA抽提液，按以下说明进行DNA核酸的粗提。也可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的DNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品，并按照相应试剂盒说明进行操作。

血液样本：直接取200μl 抗凝血，转至一洁净的1.5ml 离心管中，加入1ml 双蒸水，剧烈震荡30s，8000rpm 离心5min，弃上清，至无明显红色沉淀。(若沉淀明显，请再重复上述步骤一次)。加入1ml生理盐水，剧烈震荡15s，13000rpm 离心5min，弃上清。沉淀加入50μl 核酸提取液(使用前请室温溶解并充分混匀)并与沉淀混匀，100℃恒温10min，13000rpm 离心3min，取上清4μl 进行PCR 反应。

肺、淋巴结等固体组织：剪取约0.1g 组织，用生理盐水洗去血污，剪碎加入0.5mL TE 转移到匀浆器中匀浆。将匀浆液50μl 转移到1.5mL 离心管中，加入50μl 核酸提取液(使用前请室温溶解并充分混匀)并与沉淀混匀，100℃恒温10min，13000rpm 离心3min，取上清4μl 进行PCR 反应。

乳液等液体标本：取标本2-3mL，13000rpm 离心3min，弃上清，沉淀加入50μl 核酸提取液(使用前请室温溶解并充分混匀)并与沉淀混匀，100℃恒温10min，13000rpm 离心3min，取上清4μl进行PCR 反应。

 注：阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取5μL 加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高，建议zuì后在样品制备区域加入阳性对照。



七、检测步骤：

7.1 PCR 扩增

从试剂盒中取出荧光PCR 反应液(卵形疟原虫-qPCR MIX)、酶混合物(DNA Polymerase MIX)，室温融化并振荡混匀后，10000rpm 离心10s。

设所需要的PCR 反应管管数为N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：

试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量

荧光PCR反应液 14µL N×14µL

酶混合液 1µL N×1µL

总量 15µL N×15µL

计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm 离心10s，向设定的N 个PCR 反应管中分别加入15μL，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(PTC)5μL，10000rpm 瞬时离心10秒。

7.2 qPCR反应条件

将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。

推荐循环条件:

1循环 50℃ for 2 min

预变性 1循环 95℃ for 10 min

PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec

60℃ for 60 sec

在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。



八、结果分析：

8.1 结果分析条件设定

直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的zuì高点为准。

8.2 试验成立判定

阴性对照(NTC)：不应产生任何的扩增曲线。

阳性对照(PTC)：均产生扩增曲线。

以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效。

8.3 结果判定

在试验成立的条件下，Ct值≤35的样本为阳性，表明卵形疟原虫核酸阳性。

Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明卵形疟原虫核酸阴性。

如果35＜Ct值≤40，判为可疑样品。对于可疑样品，先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线，则为可疑阳性，否则判为阴性。

对于可疑阳性样品，重新抽提核酸，再次进行卵形疟原虫real time PCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明卵形疟原虫核酸阳性；否则判为样本阴性。



九、注意事项：

(1)初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。

(2)所有使用的离心管应高压灭菌，而且必须不含DNA酶。

(3)PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR 扩增区等)，防止实验室污染。

(4)样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。

(5)试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。





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规格：48次/盒

一、简介：

本试剂盒用一对副溶血性弧菌耐热相关溶血素特异性引物，结合一条特异性探针，用荧光PCR技术对副溶血性弧菌耐热相关溶血素的核酸进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。



二、用途：

该试剂盒适用于检测水样粪便、疑似污染的水、食物等样本中的副溶血性弧菌耐热相关溶血素(TRH)，用于副溶血性弧菌耐热相关溶血素(TRH)感染的辅助诊断，其检测结果仅供临床参考。



三、试剂盒组成：(48T)

组份	数量	规格
TRH反应液(TRH-qPCR MIX)	1管	672μL/管
DNA抽提液(DNA Extraction)	2管	1.5mL/管
酶混合物(Enzymes MIX)	1管	48μL/管
阴性对照(NTC)	1管	50μL/管
TRH阳性对照(TRH -PTC)	1管	50μL/管

四、荧光PCR 仪器适用范围

ABI 系列、MJ 系列、Roche 系列，博日系列及其他荧光定量PCR 检测仪。



五、储存条件及有效期：

本试剂盒于-20℃以下保存，有效期为6 个月。



六、样品采集、前处理与DNA 提取

6.1 样品采集

水样便取0.5-1 mL；疑似污染的食物取1g。

6.2 样本前处理：

水样便13000rpm离心2min，去尽上清；疑似污染的食物用手术剪剪碎混匀后取0.05g于研磨器中研磨，加入1.5mL生理盐水后继续研磨，待匀浆后转至1.5mL灭菌离心管中，8000rpm离心2min，取上清液100μL于1.5mL灭菌离心管中；疑似污染的水直接取100μL。

6.3 DNA提取

可采用PCR试剂盒配备的DNA抽提液，按以下说明进行DNA核酸的粗提。也可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的(DNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)，并按照相应试剂盒说明进行操作。

对上述处理好的样本加入50uL核酸提取液，100℃恒温处理10min，13000rpm离心5min，取上清液转移至新的1.5mL EP管，-20℃保存；

 注：阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取5μL加入到反应体系中即可。

由于阳性对照浓度较高，建议zuì后在样品制备区域加入阳性对照。



七、检测步骤：

7.1 试剂的准备

从试剂盒中取出荧光PCR 反应液(TRH-qPCR MIX)、酶混合液(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm 离心10s。

设所需要的PCR 反应管管数为N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：

试剂	每个反应加入的量	N个反应加入的量
荧光PCR反应液	14μL	N×14μL
酶混合液	1μL	N×1μL
总量	15μL	N×15μL

计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N 个PCR 反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(TRH-PTC)5μL，10000rpm 瞬时离心10秒。

7.2 qPCR反应条件

将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。推荐循环条件：

	1循环	50℃ for 2 min
预变性	1循环	95℃ for 10 min
PCR扩增	40循环	95℃ for 15 sec 60℃ for 60 sec

在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。



八、结果分析：

8.1 结果分析条件设定

直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的zuì高点为准。

8.2 试验成立判定

(1)阴性对照(NTC)：不应产生任何的扩增曲线。

(2)阳性对照(TRH-PTC)：均产生扩增曲线。

(3)以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效。

8.3 结果判定

(1)在试验成立的条件下，Ct值≤35的样本为阳性，表明副溶血性弧菌耐热相关溶血素核酸阳性。

(2)Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明副溶血性弧菌耐热相关溶血素核酸阴性。

(3)如果Ct值>35，判为可疑样品。对于可疑样品，先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线，则为可疑阳性，否则判为阴性。

(4)对于可疑阳性样品，重新抽提核酸，再次进行副溶血性弧菌耐热相关溶血素qPCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明副溶血性弧菌耐热相关溶血素核酸阳性；否则判为样本阴性。



九、注意事项：

(1)初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。

(2)所有使用的离心管应高压灭菌，而且必须不含DNA 酶。

(3)PCR 操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR 扩增区等)，防止实验室污染。

(4)样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。

(5)试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。



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