WH0020 酵母基因组DNA提取试剂盒（离心

特别提示：包括酵母基因组DNA提取试剂盒（离心吸附柱法)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床YL及其他非科研用途！

产品名称：酵母基因组DNA提取试剂盒（离心吸附柱法)

英文名称：Extraction kit for genomic DNA from yeast

产品货号：WH0020

产品规格：50次



本试剂盒采用GX、专一结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统，提取酵母菌基因组DNA，样品裂解后，DNA在高盐条件下与硅胶膜特异结合，在低盐、高pH值时DNA从硅胶膜上洗脱下来。纯化过的基因组DNA可直接用作PCR模板、酶切、杂交等分子生物学实验。



产品特点：

·操作简单、快速：1h内即可获得高质量的酵母基因组DNA。

·害：无需使用酚、lǜ仿等有害试剂，操作安全。

·纯度高：可直接用于PCR、酶切、杂交等分子生物学实验。



试剂盒组成：

组分	50T
缓冲液GA	15ml
缓冲液GB	15ml
缓冲液GD	13 ml
漂洗液PW	15ml
洗脱缓冲液TE	15ml
Proteinase K	1ml
吸附柱CB3	50个
收集管（2 ml）	50个

保存条件：室温（15-25℃）干燥条件下，可保存12个月，更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下，若溶液产生沉淀，使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间，必要时可在37℃水浴中预热10min，以溶解沉淀。



选配组分：RNase A（100mg/ml）（目录号:WH0217）。



需要自备的试剂：Lyticase（目录号：WH0216）,山梨醇buffer



菌体浓度检测：

可采用分光光度计或平板培养法检测菌体量，一般对于酿酒酵母，OD600值为1.0时，相当于1～2×10⁷cells/ml。



注意事项：（请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项)

1．样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。

2．若缓冲液GA或GB中有沉淀，可在37℃水浴中重新溶解，并摇匀后使用。

3．所有的离心步骤均为使用台式离心机在室温下进行。



使用方法：

使用前请先在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。



1．取酵母细胞（zuì多不超过5×10⁷cells），12000rpm（~13400×g)离心1 min，尽量吸除上清（菌液较多时可以通过几次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中）。

2．酵母细胞壁的破除：

  酶法：向菌体中加入600μl山梨醇buffer，加入大约50U Lyticase（客户自备，目录号：WH0216），充分混匀。30℃处理30 min。4000rpm（~1500×g)离心10min，弃上清，收集沉淀。

  注意：以上为5×10⁷酵母细胞的Lyticase用量，根据酵母的菌株和酵母细胞数量的不同，所用Lyticase的浓度和孵育时间应该进行适当调整。

3．向沉淀中加入200 μl缓冲液GA重悬沉淀，充分混匀。

  如果需要去除RNA，可加入4 μl RNase A（100mg/ml）溶液（客户自备，目录号：WH0217），振荡15 sec，室温放置5 min。

4．加入20 μl Proteinase K溶液，混匀。

5．加入220 μl缓冲液GB，充分颠倒混匀，70℃放置10min，溶液应变清亮，简短离心以去除管盖内壁的水珠。

  注意：加入缓冲液GB时可能会产生白色沉淀，一般70℃放置时会消失，不会影响后续实验。如溶液未变清亮，说明细胞裂解不彻底，可能导致提取DNA量少和提取的DNA不纯。

6．加220 μl无水乙醇，充分颠倒混匀，此时可能会出现絮状沉淀，简短离心以去除管盖内壁的水珠。

7．将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CB3中（吸附柱放入收集管中），12000rpm（~13400×g )离心30 sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。

8．向吸附柱CB3中加入500 μl缓冲液GD（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000rpm（~13400×g )离心30 sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。

9．向吸附柱CB3中加入600μl漂洗液PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12000rpm（~13400×g )离心30 sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。

10．重复操作步骤9。

11．将吸附柱CB3放回收集管中，12000rpm（~13400×g)离心2 min，倒掉废液。将吸附柱CB3置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。

  注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验。

12．将吸附柱CB3转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50-200 μl洗脱缓冲液TE，室温放置2-5 min，12000rpm（~13400×g )离心2 min，将溶液收集到离心管中。

  注意：为增加基因组DNA的得率，可将离心得到的溶液再加入吸附柱中，室温放置2 min，12000rpm （~13400×g )离心2 min。洗脱缓冲液体积不应少于50 μl，体积过小影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用ddH2O做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率；且DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。



DNA浓度及纯度检测：

1．得到的基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。

2．DNA应在OD₂₆₀处有显著吸收峰，OD₂₆₀值为1相当于大约50μg/ml双链DNA、40 μg/ml单链DNA。

3．OD₂₆₀/OD₂₈₀比值应为1.7-1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，使用ddH2O，比值会偏低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。



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名称：柱式血液DNA提取试剂盒

货号：BTN60306

规格：50次

本试剂盒是基于离心柱/硅胶膜原理的、专门用于从新鲜或冷冻的动物(包括人和禽类)抗凝全血中提取基因组DNA的试剂。



产品特点：

1. DNA纯净，OD260/280在1.8-2.0之间。不含蛋白质和RNA污染，可直接用于PCR、酶切、杂交等。

2.产量高，一般为1-10μg/mL全血(对哺乳动物血液)。

3. 操作简单，整个过程约20分钟，全室温操作，适合大规模样品处理。

4. 用量广泛，每次可以处理少达20μl(对禽类动物血液)，多达1mL的血液(对哺乳动物血液)。

5. 安全，本试剂盒对人体，无腐蚀性和刺激性气味。



试剂盒组成：

成分	规格
红细胞裂解液(A型)	25ml
溶液A	25ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
DNA洗脱液2.0	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输、4℃保存，有效期一年。



使用方法：

1.在0.02-1mL新鲜或抗凝血液(冷冻血需先37℃水浴融化)中加入0.5mL红细胞裂解液(A型)，吹打混匀。

a)哺乳动物，血液使用量以300μl以下为宜，使用量越大产量越高，但产率会降低。如果血液多于300μl，重复1-2步两次可以提高产率。

b)禽类动物，血液使用量以20μl以下为宜，可以从第3步做起。

2.室温12000～15000rpm离心5分钟，沉淀呈粉红色，小心倾去上清。

3. 再短暂离心半分钟，吸弃残留的液体。此步有利于后面的细胞裂解，但一般可以省略。

4. 向有沉淀的离心管内加入0.5mL溶液A(溶液A有少量晶体沉淀，用前需要摇晃均匀)，用移液枪吹打使沉淀充分悬浮起来。此步目的是裂解细胞，释放DNA，所以吹打越充分越好。

5. 静置2分钟待溶液变清亮后，将液体转移到离心吸附柱中并静置2-5分钟，以使DNA与膜充分结合。

6. 12000rpm离心半分钟，DNA将吸附到膜上，弃收集管中的废液。

7. 加入0.7mL的通用洗柱液，12000rpm离心半分钟，弃收集管中的废液。

8. 加入0.3mL的通用洗柱液，12000rpm离心半分钟，弃收集管中的废液。

9. 12000rpm离心半分钟，甩干残留液体。此步很重要，以去除膜上残留通用洗柱液，否则会影响后续反应。

10. 将离心吸附柱置于一新的1.5mL塑料离心管(自备)中，加入适量50μl DNA洗脱液2.0，室温放置2分钟。如果将DNA洗脱液2.0在65℃预热后再使用，洗脱DNA的效果会更好。

11. 12000rpm离心半分钟，离心管底溶液即DNA溶液。可以立即使用或放冰箱长期保存。



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