BTN80103 柱式细菌RNA提取试剂盒

特别提示：包括柱式细菌RNA提取试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床YL及其他非科研用途！

产品名称：柱式细菌RNA提取试剂盒

英文名称：Bacterial RNA Column extraction kit

产品货号：BTN80103

产品规格：50次



本试剂盒是细菌RNA提取试剂盒(BTN51102)的柱式升级产品，用于快速从各种常见的革氏阴性细菌中提取总RNA。如需提取革氏阳性细菌的RNA，可以选择柱式真菌RNA提取试剂盒。跟细菌RNA提取试剂盒相比 它具有下列特点:

1. 操作更加简单快速，省去了zuì费时的离心步骤。

2. 所得 RNA 纯度更高，OD260/OD280一般在 2.0左右.

3.一般不含基因 DNA污染。

4.适用于各种革氏阴性细菌。

5. 性价比高于进口同类产品。



试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	30ml
溶液B	20ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
RNA洗脱液	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。



使用方法：

下面的操作步骤是针对在 1.5mL塑料离心管中进行的微量提取的。



1. 新鲜配制裂解液。将溶液A和溶液B 按 1:1的比例混合。注意：溶液A和溶液B 混合后必须立即使用，不要放置，否则会产生沉淀。一次处理1.5mL左右的细菌需要0.6mL新鲜配制的裂解液(即0.3mL溶液A和0.3mL溶液B的混合液)。

2.在 1.5mL塑料离心管中离心收集0.2-1.5mL 新鲜细菌。注意:由于细菌RNA 半衰期十分短，所以，必须使用zuì新鲜的、处于对数生长期的细菌。

3. 吸尽液体培养基，加入0.6mL 新配制的裂解液，用枪充分吹打细菌沉淀，确保细菌全部裂解，没有块状物。

4. 将裂解物转移至一个干净的1.5mL塑料离心管中，然后加入0.2倍体积的自备氯fǎng(1mL 裂解物需 0.2mL 氯fǎng)，振荡器上充分振荡混均 30秒。

5. 12000～15000g室温离心 3～5分钟。

6. 将上清液(约0.6-0.8mL)转移到离心吸附柱中。注意：离心后下层有 机相和中间层含有 DNA和蛋白质，避免触及，否则将产生蛋白质和DNA污染。为保险起见，可以留下 100μL上清液不取。同时吸取上清时zuì好缓慢进行，否则容易吸出交界面的不可见的丝状 DNA。

7. 12000～15000g室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。

8. 加 0.7mL 通用洗柱液到离心吸附柱中，室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。一次洗涤一般足够去除杂质。但如果样品 OD260/280 比值不高，可以再用0.3mL通用洗柱液重复此步一次。

9.室温 12000～15000g离心半分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会影响 RNA的使用。

10. 将离心吸附柱转移到一自备的RNase-free 收集管中，加入50-100μL RNA 洗脱液。

11.室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。

12. RNA 完整性的电泳检测：如果需要做 Northern杂交，强烈建议用户使 用甲醛变性胶进行 RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。

13. RNA产量产率测定：将5-10μl RNA 溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2 之 间)检测其在 OD260的光吸收。通过光吸收可以得出 RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出 RNA的产量(浓度 X 体积)和产率(RNA产量/组织用量)。

14. RNA 纯度测定：无污染的总 RNA的OD260/OD280一般在 1.8-2.1 之 间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分 别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响 RT-PCR等反应。



疑难解答：

Q：上样孔里的红色荧光物一定是DNA污染吗？

A：不是。用 TAE或TBE电泳液和非变性胶电泳 RNA时容易产生此现象，百奥莱博初步研究发现大部分红色荧光物是变性不充分的单链RNA 通过碱基 互补或通过硼酸络合(如果使用 TBE作电泳液的话)形成的复合物，加 RNase处理后，这些红色荧光物(RNA)一般会消失。为避免此现象，建议 zuì好使用甲醛变性胶电泳和RNA 专用上样液(如我们的RNAload)。

Q：如何确认和去处除污染的基因组 DNA？

A：如果怀疑有 DNA污染，可以用 RNase处理 RNA样品，然后再电泳。如 果上样孔里的红色荧光物不消失，则表示是基因组 DNA污染。进一步确认可以使用 PCR扩增法。去除污染的DNA可以使用百奥莱博的非酶的DNA 去除剂 DNA Scavenger或RNase-free DNase，由于RNase-free DNase一 般都有残留 RNase污染，所以必须严格按照厂家提供的使用手册进行操作。



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