BTN70804 一步法单菌落质粒DNA提取试剂盒

特别提示：包括一步法单菌落质粒DNA提取试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床YL及其他非科研用途！

产品名称：一步法单菌落质粒DNA提取试剂盒

英文名称：One-step single colony plasmid DNA extraction Kit

产品货号：BTN70804

产品规格：50次



本试剂盒是在一步式质粒DNA提取试剂盒(BTN70301)基础上开发的、能够从单个菌落快速提取质粒DNA的产品。它之所以能够从单个菌落中提取到可以用常规电泳方法检测得到的质粒DNA是由于一步式细菌裂解技术能够使细菌释放出其几乎所有的质粒DNA。



试剂盒特点：

1. 不需过夜培养细菌就可以提取质粒DNA，能为研究人员节约一天的宝贵时间。

2.快速，整个过程只需要不到十分钟(对一个样品而言)。

3.一步式裂解细菌，不使用强碱溶液，对DNA 损伤小。

4. 得到的质粒DNA 足够1-2次电泳或酶切实验，足够多次PCR、测序和细菌转化实验。

5.适用于高拷贝、中拷贝和低拷贝的质粒。



试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	5ml
离心吸附柱	50只
离心吸附柱收集管	50只
通用预洗液	50ml
通用洗柱液	100ml
DNA洗脱液2.0	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输及保存(溶液A需要4℃保存)，有效期一年。



使用方法：

1. 用吸头挑取一个直径在2 mm以上的菌落到100μl一步法单菌落质粒DNA提取试剂盒溶液A中(溶液A用前摇匀)，充分吹打或振荡裂解直到裂解液变澄清。

2. 直接将裂解液全部转移到离心吸附柱中，室温静置2分钟使质粒DNA与膜结合。室温12000～15000g离心半分钟，弃穿透液。

3.在离心吸附柱中加入0.7mL的通用预洗液，室温12000～15000g离心半分钟，弃穿透液。注意: 如果通用预洗液放置在低温产生了沉淀，用前需要加热到60℃左右使之融化，混匀后再用。

4. 再在离心吸附柱中加入0.3mL的通用预洗液，室温12000～15000g离心半分钟，弃穿透液。此步预洗zuì好别省略，否则DNA 纯度不高。

5.在离心吸附柱中加入0.7mL的通用洗柱液，室温12000～15000g离心半分钟，弃穿透液。

6. 再在离心吸附柱中加入0.7mL的通用洗柱液，室温12000～15000g离心半分钟，弃穿透液。此为第二次洗涤。

7. 再在离心吸附柱中加入0.4mL的通用洗柱液，室温12000～15000g离心半分钟，弃穿透液。此为第三次洗涤，如果不洗涤三次，zuì后得到的质粒DNA的OD260和280的比值达不到1.8。

8.室温12000～15000g离心半分钟，甩干残留液体。注意：此步不能省略，否则残留乙醇会影响后续的电泳上样(DNA 沉不到加样孔里去)和酶反应。

9. 将离心柱置于一个新的1.5mL自备塑料离心管中，加入30-100μl DNA洗脱液2.0，室温放置2分钟。如果将DNA 洗脱液2.0预热到65-80℃，则效果更好。

10.室温12000～15000g离心半分钟，离心管底部溶液即为质粒DNA，可以直接用于后续实验或放冰箱长期保存。



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名称：海洋动物DNA提取试剂盒(柱式提取)

货号：BTN130401

规格：50次

本试剂盒是在柱式动物DNA提取试剂盒(BTN71206)试剂盒基础上优化改良而得，专门针对海洋动物的基因组DNA提取的试剂盒，可用于鱼类、虾类、贝类、蟹类等海洋动物和水产动物的荃因组DNA提取，可以有效去除海洋动物组织中的蛋白、脂肪及其他有机化合物等杂质。



产品特点：

1. 使用本试剂盒提取的基因组DNA可适用于各种常规分子生物学操作，如:酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等试验。

2. 操作简单安全，1小时内即可获得超纯的基因组DNA，纯化过程中不需要使用苯酚氯fǎng等有机试剂。

3. 应用广泛，适用于多种动物细胞和动物组织等。

4. 性价比高，质量和国外同类试剂盒相当，价格更低。



试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	50ml
蛋白酶K溶液(20mg/mL)	1ml
溶液B	15ml
溶液C	13ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	15ml
通用洗脱液	15ml
说明书	1份

储存条件：常温运输及保存(蛋白酶K溶液需要低温运输，-20℃保存)，有效期一年。



使用方法：

使用前请先在溶液C和通用洗柱液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。



1. 切取不多于30mg的组织材料，放入装有200μL溶液A的离心管中，涡旋振荡15秒。注意：根据提取的组织不同，起始量也稍有不同，腮的细胞量较大，一般建议提取量不超过20mg。如果需要去除RNA，可加入40μL RNase A(10mg/mL)溶液(客户自备，BTN3160)，振荡15秒，室温放置5分钟。

2. 加入20μL蛋白酶 K溶液(20mg/mL)，涡旋混匀，简短离心以去除管盖内壁的水珠。在56℃下放置，直至组织完全溶解，简短离心以去除管盖内壁的水珠，再进行下一步骤。注意：不同组织裂解时间不同，通常需0.5-2小时即可完成。扇贝组织0.5小时基本可裂解完全，虾和鱼类组织1小时。每小时振荡混合样品2-3次，每次振荡混匀15秒。

3. 加入200μl溶液B，充分颠倒混匀，70℃放置10分钟，溶液应变清亮，简短离心以去除管盖内壁的水珠。注意：加入溶液B时可能会产生白色沉淀，一般70℃放置时会消失，不会影响后续实验。如溶液未变清亮，说明细胞裂解不彻底，可能导致提取DNA 量少和提取出的DNA 不纯。

4. 加入200μl 无水乙醇，充分颠倒混匀，此时可能会出现絮状沉淀，简短离心以去除管盖内壁的水珠。

5. 将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个离心吸附柱中(吸附柱放入收集管中)，12000rpm(～13,400×g)离心30秒，倒掉废液，将吸附柱放回收集管中。

6. 向离心吸附柱中加入500μl溶液C(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm(～13,400×g)离心30秒，倒掉废液，将吸附柱放入收集管中。

7. 向吸附柱中加入600μl 通用洗柱液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm(～13,400×g)离心30秒，倒掉废液，将吸附柱放入收集管中。

8. 重复操作步骤7。

9. 将吸附柱放回收集管中，12000rpm(～13,400×g)离心2分钟，倒掉废液。将吸附柱置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验。

10. 将吸附柱转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50-200μl 通用洗脱液，室温放置2-5分钟，12000rpm(～13,400×g)离心2分钟，将溶液收集到离心管中。注意：通用洗脱液的体积不应少于50μl，体积过小影响回收效率。为增加基因组DNA的得率，可将离心得到的溶液再加入吸附柱中，室温放置2分钟，12000rpm(～13,400×g)离心2分钟。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用超纯水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5 范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率；且DNA产物应保存在-20℃，以防DNA 降解。



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