App NGS 表观组测序 RRBS甲基化测序
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重亚硫酸盐转换原理
重亚硫酸盐(HSO3-)可将未甲基化C转换为U,但不能讲甲基化C转变为T。
DNA测序技术在重亚硫酸盐处理样本前后对DNA基因组进行测序,经前后序列比对可判别甲基化状态
技术优势
精确度高:在其覆盖范围内可达到单碱基分辨率;
重复性好:多样本的覆盖区域重复性可达到85%-95%,适用于多样本间的差异分析;
检测范围广:覆盖全基因组范围内超过5百万个CpG位点;
性价比高:测序区域更有针对性,数据利用率更高
一、样本要求
总量:≥ 3 μg DNA(常规样本),≥ 5 μg DNA(FFPE或降解DNA样本);
纯度:OD260/280 = 1.8-2.0;
样品完整性:DNA无明显降解与蛋白污染,需提供凝胶电泳检测胶图;
适用物种:人和小鼠
二、测序策略: 50 PE。
三、推荐数据量:3G或5G clean data。
四、项目执行周期
单个样品标准流程(上图)的运转周期约为45个工作日。遇样品数较多时,项目周期根据项目规模而定。
五、合格指标
产生不低于合同规定的clean data。
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