毫克级抗体快速表达/抗体制备/抗体高产/抗体表达(CHO-MCI)

❀实验流程

1. 亚克隆：将客户优化好的目的基因（吉锐生物也可以提供基因优化服务）克隆到吉锐生物定点整合载体上；
2. 转染：采用的 CHO-MCI（多拷贝整合）技术，将定点整合载体电转到 CHO-SC 细胞中；
3. 稳转池验证：30ml 摇瓶小试表达目的蛋白并纯化。将细胞培养上清通过合适的，可与重组表达目的蛋白的标签结合的柱填料进行纯化，SDS-PAGE跑胶，同时通过上牛血清白蛋白（BSA）作为对照带进行定量和纯度分析。
4. 扩大培养：根据 30 ml 的定量结果，估算获得客户要求数量的蛋白所需要扩大培养的体积，拿到足够量的蛋白。

❀实验案例

案例1：

  利用 MCI 技术将红色荧光蛋白基因定点整合到 CHO-K1 细胞基因组中，配合使用 Genloci® 的产品 Cell Plaza™（GP5036）筛选阳性克隆，扩大培养后，在倒置显微镜下和荧光显微镜下观察细胞。

      利用 MCI 技术将客户的目的基因整合到 CHO 细胞基因组中，配合使用 Genloci® 产品 Cell Plaza™（GP5036）筛选阳性克隆，ELISA 结果分析显示，在挑选的 32 个克隆中，共有 16 个克隆的抗体表达量较高，其中 3 个克隆的表达量超过 12.5ng/mL。

      抗体Y 125mL摇瓶pool上清SDS-PAGE检测见figure 3，CHO-SC上清纯化后可得蛋白 272mg/L，同样条件传统CHO-S上清纯化后可得蛋白 125mg/L。生产周期4-5周，产量达到mg/10mL，满足很多客户要求，省去了很多等待时间。