HR0257 酵母线粒体提取试剂盒

特别提示：包括酵母线粒体提取试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床YL及其他非科研用途！

产品名称：酵母线粒体提取试剂盒

英文名称：Yeast mitochondrial Extraction Kit

产品货号：HR0257

产品规格：50T|100T



线粒体(mitochondria)是真核细胞中产生能量的重要细胞器。细胞中的能源物质-脂肪、糖、部分氨基酸在此进行zuì终的氧化，并通过偶联磷酸化生成ATP，供给细胞生理活动之需。

对线粒体结构与功能的研究通常是在离体的线粒体上进行的。

我司酵母线粒体提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种酵母样品中提取线粒体。提取过程简单方便。

本试剂盒不能用于冷冻样品的线粒体提取。



储存条件：2-8℃保存。开盖后组份按要求条件保存。

各组份储存条件：线粒体提取液2-8℃保存；酵母洗涤液长期不用时-20℃保存。

有效期：一年。

使用前请仔细阅读产品说明书

使用限制：本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或ZL。

产品更新：我司会更新或升级产品，以优化和增强其使用性能，产品说明书会进行相应的版本更新。使用产品时，请参照随产品附带的说明书，不要参照网上下载的说明书，可能是不同的版本。

使用安全： 使用时需要合适的实验室外套，一次性手套。避免皮肤或粘膜与试剂接触。如果试剂不小心接触皮肤或眼睛，应立即用水冲洗。



注意事项：

●本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或ZL。

● 使用前请仔细阅读产品说明书。

● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。

● 禁止与其他品Pai的试剂混用，否则会影响使用效果。

● 样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。

● zuì好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。

● 避免皮肤或粘膜与试剂接触。



试剂盒以外自备试剂和仪器：

● PBS缓冲液● 移液器、吸头 ●离心机及离心管 ● 涡旋振荡器 ● 振荡器/脱色摇床



使用方法：



使用注意事项：

● 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

● 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。



1．酵母培养物，在4℃，5000g条件下离心5-10分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集酵母沉淀。

2．用PBS洗涤酵母两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。

3．每100μl体积酵母沉淀物中加入400μl酵母线粒体提取液A，混匀后，在30℃条件下保温15分钟。

【注】：

① 酵母数量根据实验情况调整，每次的裂解液用量并不是一定的，请根据实际情况调整。

4．5000g条件下离心5-10分钟，收集酵母沉淀。

5．用300μl酵母洗涤液D洗涤酵母一次，离心收集菌体。

6．酵母沉淀物中加入500μl酵母线粒体提取液B，混匀后，在37℃或室温条件下轻微振荡45-60分钟。

7．在5000g条件下离心5-10分钟，收集沉淀，弃上清。

8．沉淀用300μl酵母洗涤液D洗涤两次。离心收集沉淀。

9．沉淀中加入400μl酵母线粒体提取液C，高速涡旋15秒混匀，然后在振荡器上振荡10-30分钟。

10．再次高速涡旋振荡5秒，然后在4℃，500g条件下离心5分钟。

11．将上清吸入另一干净离心管，收集上清，弃沉淀。

12．在4℃，11000g以上条件下离心20分钟。

13．弃上清，在沉淀中加入400μl线粒体保存液E，混匀。

14．在4℃，11000g以上条件下离心20分钟。

15．弃上清，即得到线粒体样品。

16．沉淀用相应的缓冲溶液重悬。置冰箱备用或直接用于下游实验。



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货号	名称	规格
BTN131134	Percoll	250mL
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名称：Percoll

货号：BTN131134

规格：250mL

Percoll是一种常用的低粘度的密度梯度介质，由直径在15-30nm的硅胶颗粒组成，颗粒外包被了聚乙烯吡咯烷酮(PVP)，为化学惰性，不会影响细胞的活性。



产品特点：

1．Percoll渗透压很低(<20mosm/kg H2O)，粘度也很小，可形成高达1.3g／ml 密度。

2．采用预先形成的密度梯度时可在低离心力(200～1000g)于数分至数十分钟内达到满意的细胞分离结果。

3．离心后能形成1-1.3g/mL的密度梯度，可用于分离各种悬浮的细胞、线粒体、叶绿体和病毒(可小到70S)。

4．由于Percoll扩散常数低，所形成的梯度十分稳定。此外，Percoll不穿透生物膜，对细胞害，因此广泛用于分离细胞、亚细胞成分、细菌及病毒，还可将受损细胞及其碎片与完好的活细胞分离。

5．Percoll溶液高压灭菌，必须进行不添加盐或蔗糖。盐的存在会引起percoll糊化，蔗糖的存在会引起焦糖化。



储存条件：常温运输和保存，有效期五年(未开封状态)。



使用方法：

1．不同浓度(密度)Percoll溶液的制备：先用9 份Percoll与1份 8.5％ NaCl或1.5MPBS混合达到生理性渗透压，然后用生理溶液(0.85％ NaCl或0.15M PBS)稀释到所需浓度。

Percoll浓度(％)	70	60	50	40	30	20
比重g/ml	1.090	1.077	1.067	1.056	1.043	1.031

2．不连续密度梯度Percoll层的制备：先将试管壁用牛血清湿润，除去多余血清，这种预处理可使逐层叠加的Percoll液平稳沿管壁流下，使形成满意的界面。在制备过程中一般用长针头注射器从高密度向低密度逐层放置，有时相邻两层Percoll 比重相差不大时，可将Percoll液放入注射器中，小针头斜面紧贴管壁，任其自然慢慢流下。

3．装样：样品体积和细胞浓度根据不同细胞而异，一般加样体积不宜过大，细胞浓度也不可过高，否则会影响细胞的分离和回收。

4．离心：一般采用离心力为400g，时间20～25min。由于多层Percoll 之间密度差别不大，因此离心机加速、降速时要慢，要平稳。

5．取样：当所要分离的细胞绝大部分在两层的界面时，可逐层去除Percoll液后收集界面部位的细胞;有时大部分细胞位于Percoll 层中,则需要逐层收集。收获含有Percoll液的细胞经2次洗涤后可供培养或检测用。



分离纯化细胞举例

1．富含NK活性大颗粒淋巴细胞(LGL)的纯化:按顺序由下向上逐层加50％、47.5％、45％、42.5％和40％五种不同密度的Percoll,如用10ml 试管(或塑料管)分离,每层Percoll约1.2～1.5ml，初步从外周血中分离的PBMC细胞1×10８悬于１ml培基中，按要求装样、离心和取样。一般富含NK 杀伤活性的LGL细胞位于42.5％与45％Percoll界面以及上下二层的Percoll液中。

2．纯化淋巴母细胞和除去死细胞：分别叠加50％和30％Percoll液。收取经PHA(或其它抗原、有丝分裂原)刺激PBMC,或含有较高比例异型的PBMC(如肾综合征出血热患者)，按要求装样、离心和取样。位于管底的淋巴细胞为小淋巴细胞；两层Percoll之间为淋巴母细胞，纯度和回收率在80％以上，位于30％Percoll表面是死细胞。收获淋巴母细胞可进行表型、结构以及功能的研究。