BTN90317 一站式DNA尿素-PAGE电泳套

特别提示：包括一站式DNA尿素-PAGE电泳套装在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床YL及其他非科研用途！

产品名称：一站式DNA尿素-PAGE电泳套装

英文名称：One-Stop DNA Urea-PAGE Pack

产品货号：BTN90317

产品规格：30次



本品是专门用于DNA 尿素-PAGE电泳的一站式试剂盒。



产品特点：

1.一站式，即开即用，用户不需单独准备各种成分，十分方便。用户不需要单独准备各种成分。

2.可用于DNA 测序、AFLP、DDRT、TGGE和RNase 保护实验等。

3. 安全，免去了实验人员接触粉末状的剧毒物品丙烯酰胺。

4.电泳后可直接用于银染、EB染色等实验。



产品组成：

成分	规格	保存
电泳级尿素	210g	常温
电泳级丙烯酰胺	77.34g	常温
电泳级甲叉双丙烯酰胺	2.67g	常温
10×TBE电泳液	250ml	常温
电泳级TEMED	1.5ml	4℃，避光
电泳级过硫酸铵	1g	常温
2×尿素-PAGE上样液	1ml	-20℃
说明书	1份

储存条件：常温运输，保存条件见上表，有效期一年。



使用方法：



一、PAGE浓度和交联度的选择指南

尿素-PAGE一般推荐用29：1(丙烯酰胺：甲叉双丙烯酰胺)的交联度，

在此条件下，DNA片段和zuì适PAGE浓度对应关系如下：

单链DNA长度	zuì佳PAGE浓度	二甲苯青FF迁移率 对应的长度	溴酚蓝的迁移率 对应的长度
50-400nt	8%	160nt	45nt
200-1000nt	5%	260nt	65nt
750-2000nt	3.5%	460nt	100nt

二、制备尿素-PAGE胶

1. 配制尿素-PAGE胶(这是配制100mL胶的用量，配制更大体积的胶则需以此用量为基础按比例增加)

A：新鲜配制10%的APS(过硫酸铵)：按每0.1 克过硫酸铵干粉加1mL超纯水的比例将水加到装有硫酸铵干粉的1.5mL EP 管中，摇晃到粉末全部溶解。配制好的10%的APS溶液可以在4℃存放一周。

B：新鲜交联度为29:1的40%的丙烯酰胺-甲叉双丙烯酰胺溶液(AB溶液，下同)：在装有77.34 g电泳级丙烯酰胺干粉的瓶中加入约120mL自备的去离子水，然后将全部甲叉双丙烯酰胺加入到同一塑料瓶中(可以加少量丙烯酰胺溶液冲洗出来以避免粉末有毒粉末飘出。甲叉双丙烯酰胺溶解度低，不会溶解在这少量溶液中)。充分摇晃混匀后所得溶液即40%的AB溶液。配制40%而非30%的原因是这样可以在下步留出足够空间加尿素。

C：配尿素-PAGE胶：在一个250mL的三角瓶中，先按下表的用量加入去离子水、40%AB溶液和10×TBE缓冲液。丙烯酰胺单体溶液具有神经毒性，一定要戴手套操作。

PAGE胶浓度	各成分用量(尿素为克，其余单位是mL)			补水到(mL)
	尿素	40%AB溶液	10×TBE缓冲液
5%	42	12.5	5.0	100
6%	42	15.0	5.0	100
7%	42	17.5	5.0	100
8%	42	20.0	5.0	100
9%	42	22.5	5.0	100
10%	42	25.0	5.0	100
11%	42	27.5	5.0	100
12%	42	30.0	5.0	100

D：搅拌溶解，然后用滤纸过滤。zuì好能抽真空10-15分钟以去除溶液中的氧气(氧气能YZ丙烯酰胺聚合反应)，无条件也可以不脱氧。

E：加入500μL 10%APS和100μL TEMED，迅速摇匀后倒胶。

F:在胶的液面距离达到顶部时停止灌胶，插入梳子。

G:室温聚合30-60分钟(低温YZ聚合反应)。

H: 拔出梳子，用0.5×TEB液冲洗加样孔。



三、样品准备

2. 对一般样品、测序样品、微卫星DNA、AFLP样品、DDRT样品、RPA样品：将样品跟上样液1:1 混合，95℃ 3分钟变性，然后放冰上待用。

3. 对TGGE样品：可以直接上样。



四：电泳

4. 将凝胶板固定在电泳装置上，往上槽和下槽中加入足够0.5×TEB电泳液。

5.预电泳5-30分钟将冰上放置的样品上样。

6.连接电源线，打开电源开关。根据胶的大小选择功率(固定功率可以固定产热，这样不容易发生过热而使胶板破裂的现象。如果固定电流或电压，产热都将随电泳时间而变化，不好控制)。对小胶一般用5-6W 固定功率，大胶用15-25W 固定功率。

7. 终止电泳，取出凝胶进行后续的处理(如银染)。注意：如果银染，必须延长固定时间以便让洗出尿素，否则残留尿素会干扰后面的银染。



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货号：BTN51210

规格：50L

SuperBuffer-2是我司在SuperBuffer基础上开发的DNA/RNA 两用快速电泳液。它跟SuperBuffer一样，能以高达30 V/cm的电压电泳，达到快速电泳的目的。跟SuperBuffer 不同的是，本产品对盐离子浓度敏感度低，同时还能用于RNA电泳。



产品特点：

1.快速，电泳时间短，对分辨率要求不高的电泳(如PCR和酶切检测等)甚至可以在5-10分钟内完成。

2. 不影响后续的Southern杂交，DNA胶回收和DNA连接等反应。

3. 价格与TBE(干粉)相当甚至更便宜。

4. DNA胶回收率高于使用TAE和TBE电泳的胶回收。



储存条件：常温保存和运输，有效期两年。



使用方法：



一：溶液的配制

将本产品全部加到一个干净的容量适当的容器中，按下表的用量加入蒸馏水并在室温下用磁力搅拌器搅拌，直到干粉完全溶解(一般需要30分钟左右)。

配法一(配制20X浓缩液)：加2.5升得到20×工作液

配法二(直接配制工作液)：加水50升得到50×工作液

注：其他浓度的浓缩液配制可以按比例计算，但浓缩液浓度不能超过20×，否则干粉不能全部溶解。由于干粉含多种未彻底混合均匀的成份，所以必须一次性全部用于溶液的配制。如果缓冲液(浓缩液或工作液)长时间不用，zuì好灭菌后放4℃长期保存。



二：DNA电泳

将SuperBuffer-2浓缩液用蒸馏水稀释到1×，除了需要使用较高电压才能得到快速的电泳结果外，操作跟使用TAE和TBE基本一样。需注意的地方是：

1.电压：在SuperBuffer-2溶液中既可以使用常规电压，也可以使用较高电压，只是使用常规电压时，其快速的优越性就体现不出来。使用较高电压时，由于各电泳槽结构不同，zuì佳电压需要稍做摸索。次zuì好将工作电压调到zuì高电压的80%左右，即平均25 V/cm(电极距离)。对一般minigel，一般可以用250-350V 跑5-10分钟；对大的电泳槽，可用400-450V 跑5-10分钟。每次根据电泳结果和缓冲液温度决定各电泳槽的zuì佳工作电压和时间。一般电压越高，电泳时间越短。若在电泳时发生电流或电压逐渐下降的现象，请检查电泳仪是否设置了电流上限或功率上限。缓冲液电泳次数超过3次或缓冲液中有细菌/真菌生长也会出现此现象，需要更换新的缓冲液。

2.胶浓度：建议将琼脂糖凝胶的浓度控制在0.8%左右，对于长度在100bp以下的DNA片段，可以将琼脂糖凝胶的浓度提高到1.2%左右。由于每次溶胶过程中会丢失水份，所以zuì好在溶胶后适当补充水份(可以前后称重)，否则胶浓度会逐渐增加，DNA的移动速度会减低、产热会增加。使用0.8%左右的琼脂糖凝胶的好处是一方面可以节约胶的用量，另一方面可以使DNA的泳动速度更快，同时还能够提高DNA的回收率。

3.染色：如果使用EB，zuì好把染料加入到融化后的凝胶中(只是EB的终浓度zuì好为0.4 -0.5μg/mL，比使用TAE和TBE时稍高)，但也可以加入到电泳缓冲液中或/和电泳上样液中。如果使用百奥莱博低毒染料绿如蓝，zuì好将染料加入到融化后的凝胶中。如果只有胶中有染料，则长时间电泳后(超过20分钟)，大部分染料在高压下会与DNA 分离，DNA 条带可能会看不见或看起来很淡，此时应该再染色一次。在染色液中加入一定的量的NaCl(终浓度≥0.05 mol/L)能提高染色效果。SuperBuffer-2与SYBR Green I 也有良好的兼容性，可以结合使用。

4. DNA 条带扭曲：DNA样品中所含SDS 量过高时(SDS 主要来于上样液)，DNA条带将出现扭曲，影响实验效果。建议使用不含SDS的上样液。

5. 反复使用：1×SuperBuffer-2电泳液至少可以重复使用2-3次，如果使用大电泳槽，可以重复使用的次数会更多。

6. TAE和TBE胶：已经用TAE和TBE电泳液配置好的琼脂糖凝胶可以直接放入1× SuperBuffer-2电泳液中按上述电泳条件电泳，但有时候会有扭曲现象。



三：RNA电泳

跟DNA电泳一样，必须在使用前用水将SuperBuffer-2溶液稀释到1×，其使用方法跟DNA电泳的主要区别是：

1.电压：RNA电泳时，zuì高使用电压大约只有DNA zuì高使用电压的一半左右，所以一般minigel可以使用150 V左右的电压。由于各实验室电泳槽规格各异，次电泳时，zuì好将工作电压调到跟MOPS电泳一样的电压，每次再逐渐往上调电压和时间，根据电泳结果和测定缓冲液的温度决定今后的工作电压。

2. RNA上样液：RNA必须与含变性剂的RNA上样液混合，并在80℃保温10分钟后冰浴2-5分钟再上样。不能直接将RNA样品上样或使用DNA上样液，否则电泳不但很难得到清晰的条带，并且在加样孔中还会有看似DNA污染的条带出现。推荐使用百奥莱博生产的RNA变性/上样/染色三合一即用型溶液RNAload。

3.胶浓度：RNA电泳zuì好使用1%-1.5%的琼脂糖凝胶，用1X SuperBuffer-2配制。

4.染色：同DNA电泳。