JN0053 一步法RT-qPCR试剂盒

特别提示：包括一步法RT-qPCR试剂盒(荧光探针)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床YL及其他非科研用途！

产品名称：一步法RT-qPCR试剂盒(荧光探针)

英文名称：Probe One-Step qRT-PCR UltraMix

产品货号：JN0053

产品规格：100次



  本试剂盒向PCR体系中添加了荧光探针（TaqMan或Molecular Beacon等），在扩增过程中，荧光量与扩增产物量成正比，因此可通过荧光量来测定样品核酸量。本制品以RNA为模板反转录合成cDNA链，然后再以合成的cDNA为模板，继续用基因特异性引物扩增，并用荧光探针进行检测。在同一反应体系中可完成从反转录到qPCR的全部过程。

  本制品采用的酶是HotStart Taq，并结合了特别的缓冲液体系，能有效YZ非特异性反应，在更广的范围内对核酸含量进行准确定量。



试剂盒组分：

组份	体积
2×Balbscript Probe One-Step qRT-PCR UltraMix	1ml支
Balbscript RT Enzyme Mix	100μl
RNase Free Water	1ml×2支
ROX Reference Dye I	200μl
ROX Reference Dye II	200μl

产品特点：

高特异性：采用特殊工艺制造的热启动HotStart Taq DNA聚合酶，大大提高了PCR扩增的特异性。

GX：百奥莱博精心配制的RealTime PCR专用试剂，具有更高扩增效率和灵敏度。



使用建议：

请将体系上下颠倒混匀，动作轻柔，避免起泡，并经轻微离心后使用。反应液的配制、分装请使用新的（无污染的）枪头及Microtube等，尽量避免污染。

·用ROX Reference Dye I校准的Real Time PCR仪有：

Applied Biosystems 5700/7000/7300/7700/7900/7900 HT/7900 HT Fast；Applied Biosystems StepOne/StepOne Plus；其他仪器。

·用ROX Reference Dye II校准的Real Time PCR仪有：

Applied Biosystems 7500/7500 Fast；Stratagene MX4000/MX3500P/MX3000P；其他仪器。

·不需要用ROX Reference Dye校准的Real Time PCR仪有：

Bio-Rad CFX96/CFX 384/iCycler iQ5/ iQ /My iQ5/MiniOpticon/Opticon/Opticon /Chromo4；Eppendorf MasterCycler realplex/ realplex 2s。Cepheid SmartCycler；Illumina Eco qPCR；R℃he Applied Science LightCycler 480；Thermo Scientific PikoReal Cycler；Qiagen/Corbett Rotor-Gene Q/Rotor-Gene 3000/ Rotor-Gene 6000；其他仪器。



常用反应体系（20μl）：

加入物	加入量
2×Balbscript Probe One-Step qRT-PCR UltraMix	10μl
BalbscriptR RT Enzyme Mix	1μl
上游引物	0.2-1.0μM（终浓度）
下游引物	0.2-1.0μM（终浓度）
探针 10uM	0.4μl
模板	1pg～1μg
RNase Free Water	至20μl

常用PCR循环：

两步法扩增程序（推荐）：
42℃	30min
94℃	5min
35-40次循环	95℃，15s 60℃，1min
三步法PCR扩增程序(引物Tm值较低或其他原因)：
42℃	30min
94℃	5min
35-40次循环	95℃，15s 57℃，20s 72℃，30s

储存条件：-20℃



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名称：LAMP可见光染料

货号：BTN130833

规格：1mL

本产品为20×浓度的LAMP核酸染料，可以直接加入到LAMP或者RT- LAMP反应体系中，随反应进行其颜色发生改变，从而实时监测反应的进程。



产品特点：

1. 实时监测LAMP或者RT-LAMP反应进行，随反应发生其颜色发生改变。如果发生LAMP扩增，颜色由反应前的紫色变成天蓝色。

2. 使用方便，不需要开盖，不需要电泳，直接定性检测LAMP反应是否发生。

3. 灵敏度高，灵敏度跟SYBR Green I相当(但SYBR染料需要UV激发)，本产品的激发光是自然光。



储存条件：低温运输、-20℃保存，有效期一年。



使用方法：

1. 将本产品放置在室温融化，然后震荡10秒钟，短暂离心后待用。

2. 将本染料按LAMP反应体系总体积的1/20加入到LAMP扩增反应液中。

以20μL体系为例：

成分	样品管	阴性对照
LAMP Mix(2×)	10μl	10μl
FIP引物终浓度	0.8μM	0.8μM
BIP引物终浓度	0.8μM	0.8μM
F3引物终浓度	0.2μM	0.2μM
B3引物终浓度	0.2μM	0.2μM
Loop F引物终浓度(可选项)	0.4μM	0.4μM
Loop B引物终浓度(可选项)	0.4μM	0.4μM
MgCl2(25mM)	3μL	3μL
模板DNA	1-100ng	不加
Bst DNA聚合酶(8U/μL)	1.5μl	1.5μl
LAMP可见光染料	1μl	1μl
补水到	20μl	20μl

3. 观察反应液颜色变化，如果发生LAMP扩增，颜色由反应前的紫色变成天蓝色。