BTN111105 MTT检测试剂盒

特别提示：包括MTT检测试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床YL及其他非科研用途！

产品名称：MTT检测试剂盒

英文名称：MTT Assay Kit

产品货号：BTN111105

产品规格：500次



MTT广泛用于检测细胞生长，其原理是MTT可以被活细胞线粒体内的脱氢酶还原生成深紫色的formazan结晶，而死细胞则无此活性。深紫色的formazan结晶被溶解后可以通过测定490nm波长的光吸收而测定出其浓度，并由此推测出细胞的活力，细胞增殖越旺盛，则吸光度越高；细胞毒性越大，则吸光度越低。其原理如下：





产品特点：

1．采用独特的Formazan溶解液，可以充分溶解formazan，减少误差。

2．背景低，灵敏度高，线性范围宽，重复性好。

3．本产品为足够500次(5个96孔细胞培养板)微孔板检测。

4．可用于生物活性因子活性检测、抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验、肿瘤放射敏感性测定等。



试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	5ml
溶液B	50ml
说明书	1份

储存条件：低温运输、-20℃保存(但溶液B也可以常温运输和保存)，有效期一年。



使用方法：

下面操作是检测细胞毒性的试验，其他应用跟此类似或更简单(如生长曲线试验)，操作步骤可以以此为基础稍作修改即可，故不再赘述。



㈠、接种细胞

1．按常规胰酶消化法消化汇合的单层细胞，收集到含血清的培养基中。

2．200g离心5分钟收集细胞沉淀。

3．用培养基重悬细胞沉淀，制备成单细胞悬浮液并计数。

4．将细胞稀释到2.5×103个/mL～5×10个/mL之间(需要根据细胞的生长速度决定)，如果不知道生长数度，一般可以稀释到1×10个/mL。

5．将足够量的细胞悬液转移到培养皿中(便于用排枪取样)。一个96孔板的MTT检测需要约20mL的细胞悬液。

6．用排枪在96孔板除的第2-11列各孔正ZY加入200μL细胞悬液(对正常细胞)。如果是肿瘤细胞，则加入100μL肿瘤细胞悬液和100μL培养基(总体积为200μL)。注意：一定要把细胞加在孔的正中，否则细胞会聚集在孔的角落处，影响试验。

7．用排枪在96孔板除的第1和第12各孔中加入跟细胞悬液等体积的培养基。第1 列各孔将作为+培养基-细胞+MTT对照(用于测OD时调零)，第12列加培养基的作用是减少边缘效应对第11 列反应的影响。

8．按常规细胞培养方法在37℃和5% CO2条件下孵育1-3天，使细胞进入指数生长期。



㈡、药物处理

9．用培养基将药物稀释到8个待测浓度(如果不知道待测浓度，则需要预试验确定)，一般一种药物需要做3块平行板。

10．去除第2到第11列(共10列)各孔中的培养基(不要触动细胞)，保留第1 列和第12列各孔中的培养基。

11．在第2和第11列(共2列)的各孔中加入200μL新鲜培养基，这些孔将作为+培养基+细胞-药物的对照。

12．在第3到第10列(共8列)各孔中加入8个浓度梯度的待测药物，每列加入一个浓度的药物。

13．按常规方法把96孔板继续放在在37℃和5% CO2条件下孵育一定的时间，此段时间即为药物处理细胞的时间，由用户自己决定。

14．处理结束后去除第2 到第11列(共10列，均含细胞)所有孔中的培养基，并再加入100μL新鲜培养基。

15．每天换培养使细胞数量扩增2-3倍(所需时间随细胞不同而不同)。



㈢、存活细胞计数

16．在生长末期，去除第1到第11列各孔中的培养基后，再加入100μL新鲜培养基和10μL溶液A(含MTT成分)，用锡箔包裹住96孔板后放在37℃和5% CO2条件下继续培养4-8小时。注意：溶液A在低温情况下会凝固，使用前请室温放置或20-25℃水浴至全部溶解，摇匀后使用。MTT有致癌性，一定要带手套操作。

17．小心吸弃孔内培养基(含溶液A)。由于培养基可能会影响光吸收，zuì好尽可能去除。

18．每孔加入100μL溶液B，置摇床上低速振荡10分钟，使MTT形成的formazan结晶物充分溶解。

19．由于产物不稳定，故需要立即在酶联免疫检测仪上选择490nm测定吸光度。

 注意：用第1 列各孔(+培养基-细胞+MTT对照)调零。

20．计数同样处理的各次重复的平均值。

21．以药物浓度为横轴，以吸光度为纵轴绘制曲线。由于各处理吸光度值差别很大，一般需将其转化成生长YZ率(以不加药物的第2和第11列各孔数据的平均数作为)，这样便于计算出IC50，用于各种药物处理效果的比较。注意：如果测生长曲线，则以时间为横轴。正常生长曲线一般呈现S型，具有促进作用的则斜率加大。



根据您的关注的MTT检测试剂盒，您可能还对以下产品有需求：





YT129 细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒 50次

YT135 一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(绿色荧光) 20次|50次

YT897 细胞活力检测试剂盒(化学发光法) 100次|500次

SNM509 细胞周期检测试剂盒(微板比色法) 100T|50T

SNM515 DNA银染试剂盒 20T

SNM536 TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒(显色法，冰冻切片) 50T|20T

SNM537 TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒(显色法，石蜡切片) 50T|20T

KFS343 细胞有丝分裂指数分析试剂盒 100T