BTN11-171201 结核杆菌荧光探针PCR检测试剂盒

特别提示：包括结核杆菌荧光探针PCR检测试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床YL及其他非科研用途！

产品名称：结核杆菌荧光探针PCR检测试剂盒

英文名称：Mycobacterium tuberculosis qPCR Kit (TaqMan method)

产品货号：BTN11-171201

产品规格：50次



本产品是基于荧光探针PCR法的TB核酸的快速检测试剂盒，适用于绝大多数致病性结核杆菌。世界上大约30%的人口感染过结核杆菌（TB），每年TB新增患者900多万，死亡病例达170万。TB的病原菌主要分为人型结核杆菌和牛分枝杆菌，近年来又出现了结核杆菌复合群（MTC）变异株。



产品特点：

1. 即开即用，用户只需要提供样品DNA模板，操作简单，定量准确快速。

2. 根据TB基因的保守序列设计引物，引物经过优化，特异性高。预期的PCR产物长度为111 bp。

3. 采用了改良后的Taq Polymerase，具有高扩增效率，高扩增灵敏度，高扩增特异性的特点。

4. 本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。



产品组成：

组分	编号	规格(50T)
qPCR Mix，4×	BTN11-171201a	250 μL
qPCR Taq DNA聚合酶	BTN 11-171201b	25uL
TB专一性引物对	yw13791380	100 μL
TB阳性对照（10E10拷贝/μL）	yw13811382	10 μL
TB QPCR探针（FAM-BHQ1）	yw1383	100 μL
超纯水	BTN100935	1mL

保存条件：-20℃保存，有效期一年。



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一、简介：

本试剂盒用一对铜绿假单胞菌特异性引物，对铜绿假单胞菌DNA进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。



二、用途：

该试剂盒适合于检测水样粪便、疑似污染物的水、食物等样本中的铜绿假单胞菌(PA)，用于铜绿假单胞菌(PA)的辅助诊断，其检测结果仅供临床参考。



三、试剂盒组成：(48T)

组份 数量 规格

铜绿假单胞菌PCR反应液(PA-PCR MIX) 1管 672μL/管

DNA抽提液(DNA Extraction) 2管 1.5mL/管

酶混合物(Enzymes MIX) 1管 48μL/管

阴性对照(NTC) 1管 50μL/管

阳性对照(PA-PTC) 1管 50μL/管



四、储存条件及有效期：

本试剂盒于-20℃以下保存，有效期为6个月。



五、PCR仪器适用范围

ABI系列，Roche系列等PCR检测仪等。



六、样品采集与DNA提取

6.1 样品采集

6.1.1 如使用原始样本进行检测，样本(菌落、菌苔等)应新鲜采集并使用灭菌生理盐水悬浮原始样本。

6.1.2 如需在增菌后进行PCR检测，则应使用选择性增菌液对原始样本进行增菌。

6.1.3 应避免样本间交叉污染。

6.1.4 样本采集后应及时检测，也可保存于-20±5℃待检，长期保存应置于-70℃一下，样本应尽量避免反复冻融。

6.2 DNA提取

可采用PCR试剂盒配备的DNA抽提液，按以下说明进行DNA核酸的粗提。也可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的DNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品，并按照相应试剂盒说明进行操作。

6.2.1液体培养物：取液体培养物100μL加到1.5mL无菌离心管中，8000rpm离心3min，尽量吸弃上清，加入50μL DNA抽提液充分混匀，100℃恒温10min，13000rpm离心3min，取上清5μL进行PCR反应。

6.2.2固体培养物：挑取单克隆菌落与50μL DNA抽提液充分混匀，100℃恒温10min，13000rpm离心3min，取上清5μL进行PCR反应。

6.2.3 粪便样品：挑取米粒大小粪便于灭菌离心管中，加入0.5mL生理盐水，振荡混匀，13000rpm离心3分钟，弃上清，沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混匀，100℃恒温10min，13000rpm离心3min取上清5μL进行PCR反应。

6.2.4 其他液体标本：取标本2-3mL，13000rpm离心3min，弃上清，沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混匀，100℃恒温10min，13000rpm离心3min取上清5μL进行PCR反应。

 注：建议采用相关标准方法进行前增菌，并按照6.2.1方法进行提取。阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高，建议zuì后在样品制备区域加入阳性对照。



七、检测步骤：

7.1 试剂的准备

从试剂盒中取出荧光qPCR反应液(PA-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。

设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：

试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量

荧光PCR反应液 14µL N×14µL

酶混合物 1 µL N×1µL

总量 15µL N×15µL

向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(PA-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。

7.2 qPCR反应条件

将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。

推荐循环条件:

1循环 50℃ for 2 min

预变性 1循环 95℃ for 10 min

PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec

60℃ for 60 sec

在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM，淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。



八、结果分析：

8.1 结果分析条件设定

直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的zuì高点为准。

8.2 试验成立判定

（1） 阴性对照(NTC)：不应产生任何的扩增曲线。

（2） 阳性对照(PA-PTC)：均产生扩增曲线。

（3） 以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效。

8.3 结果判定

（1） 在试验成立的条件下，Ct值≤35的样本为阳性，表明PA核酸阳性。

（2） Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明PA核酸阴性。

（3） 如果35＜Ct值≤40，判为可疑样品。对于可疑样品，先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线，则为可疑阳性，否则判为阴性。

（4） 对于可疑阳性样品，重新抽提核酸，再次进行PA qPCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明PA核酸阳性；否则判为样本阴性。



九、注意事项：

（1） 初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。

（2） 所有使用的离心管应高压灭菌，而且必须不含DNA酶。

（3） PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等)，防止实验室污染。

（4） 样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。

（5） 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。