RT-PCR kit 逆转录反转录试剂盒 R1011/R1012

RT-kit（逆转录试剂盒）

货号        规格         价格

R1011      20次         600

R1012      100次       2500 

试剂盒组成：    

RT-kit（逆转录试剂盒）

货号        规格         

R1011      20次        

R1012      100次      

试剂盒组成：    

产品说明

cDNA链合成试剂盒是专为两步法RT-PCR步实验配制的、具有高灵敏度的PT-PCR反应系统。该系统合理配备了与cDNA链合成反应相关的各种组分，优化体系

的保证M-MLV具有GX的逆转录酶活性，所得cDNA对后续的PCR或定量PCR实验兼容性好，可用于检测稀有基因的表达、从极少数细胞中定量检测特定mRNA的表达水平、

克隆特定基因的cDNA片段等。

保存条件

试剂盒的各组成成分应在-20℃保存。酶在-20℃可保存1年以上，在0℃可保存3天。

操作步骤:

1.  在冰浴的无菌离心管中加入

     1-5 μg总RNA或250-500 ng mRNA，

     1 μl  Oligo(dt)₁₅ 或Random primer，

     补Rnase-free ddH₂O至12.4 μl；

2.  进行变性退火反应

      70^oC温浴5 min, 简短离心后冰浴5 min；

3.  依次加入

       4 μl        5×first-strand buffer，

       1 μl        dNTPs（10 mM each）， 

       1 μl        M-MLV，

       0.6 μl     Rnase Ihibitor；

4.  按下列条件进行反转录反应

     42 ^oC 温浴60 min （随即引物25 ^oC 温浴10 min ，37 ^oC 温浴60 min）；

5.  终止反应

     70^oC 温浴5 min终止反应,置冰上进行后续实验或-20 ^oC 保存。

6.  用RNase-free ddH2O将反应体系稀释到50 μl，取2-5 μl进行PCR扩增反应。

注意事项

1  用于cDNA 合成反应的溶液试剂尽可能用DEPC 进行处理，并在高压灭菌后使用。有些试剂不能高压灭菌时，首先用经过灭菌的器具、水等配制溶液后，再将溶液进行过滤

    CJ处理。

2  使用简单的RNA纯化方法即可获得满足于RT-PCR反应的RNA，但为了保证实验的成功率，建议使用GTC法制备的高纯度RNA。

3  试剂盒的各组成成分应在-20℃保存，酶制品应在实验前才从-20℃中取出，使用后也应立即放入-20℃保存。

4  为防止RNA降解，应尽量避免反复冻融，有条件的实验室Z好保存于-70℃。

5  的PCR反应条件，因PCR扩增仪的不同而不同，所以在使用您的样品之前Z好先试做一下control反应，以确定的PCR反应条件。

6  cDNA 产物应置于-20℃保存。