环保型琼脂糖凝胶回收试剂盒 N1081/N1082

环保型DNA凝胶回收试剂盒
 
产品组分 
溶液N           100ml      
溶液PE          15mlX2     
溶液Eluent        5ml              
DNA纯化柱        100个        
说明书          1份        

注：溶液PE初次使用前用无水乙醇按1: 4稀释，即含80%乙醇。

     

保存条件

室温2年。

 

产品说明

本产品是新型环保、无毒害的DNA凝胶回收试剂盒。实验过程涉及的试剂既不会伤害皮肤，也不会污染环境，确保您能够健康、安全的环境中轻松完成实验。同

时，本产品能够有效地保护目的DNA的完整性，提高克隆效率。一次可回收30μg高纯度DNA片段，此DNA片段可直接用于各种酶促反应等。

 

环保原理

    普通DNA凝胶回收过程中，DNA在高浓度离液盐、低pH下吸附于硅基质表面。其中所采用的离液盐一般是盐酸胍等，它们是已知的蛋白变性

剂，在环境中难降解或中和，并在操作过程中易粘在手及衣服上。如果实验室长期大量使用此类盐必然在实验室内不断累积，污染周边环境，而且将伴随尘粒吸

附到研究人员的脸部皮肤及呼吸道粘膜上，影响身心健康。

    在环保型DNA凝胶回收过程中，完全避免了盐酸胍等有毒害得离液盐，确保安全、健康、环保的实验环境。

 

产品特点

• 健康、环保：实验过程涉及的试剂既不会伤害皮肤，也不会污染环境，确保您能够健康、安全的环境中轻松完成实验。
• 完整性高：保护DNA目的片段的末端碱基。
• GX：回收率大于85%。
• 高纯度：OD_260/280=1.7-1.9。无须再酚抽提纯化，可直接使用。
• 快速：15min完成实验。

 

产品用途

• 常规限制性酶切
• PCR扩增
• 转化
• DNA序列测定
• 体外转录

 

质量控制

从1 % TAE琼脂糖凝胶中纯化50 bp和1000 bp的DNA片段。

 

操作方法

1  切取含有目的DNA片段的琼脂糖凝胶条带。

   注：尽量切除不含有目的DNA部分的凝胶，减少凝胶体积，提高DNA回收率。

           切胶时，请使用长波长UV（360 nm）光盒。且不要将DNA长时间暴露在紫外灯下，以防DNA损伤。

2  称取凝胶的重量近似地确定其体积。

   注：凝胶重量的称量方法：取1.5 ml离心管电子天平称初质量，切胶装在离心管后称终质量，两者差即为胶的质量。不同厂家离心管的重量可能有差异，因此，每个离心管的

重量需单独称量。

3  按照每100 mg琼脂糖凝胶对应300 µl溶液N的比例，向离心管中加入溶液N。

   注：如果回收的DNA片段小于150 bp，或琼脂糖浓度大于2 %时加入6倍体积的溶液N。

4  50℃水浴10min，直至凝胶完全融化。期间振荡混合3次。

   注：琼脂糖必须完全融化，以免堵塞柱子，严重影响DNA片段的回收效率。

           如果总体积大于500 µl，可适当增加融胶时间。

           若此时溶液变红，可加10 µl 3M NaAC（pH5.0）。

5  将步骤4所获溶液置于DNA纯化柱中，静置2min。

   注：胶块完全溶解后，Z好将胶溶液温度降至室温再上柱，因为纯化柱在较高温度时结合DNA 的能力较弱。

6  12,000 rpm离心1min，弃滤液。

   注：此时DNA片段被吸附于DNA纯化柱中的硅胶膜上。

           若溶液量大于DNA纯化柱的容积，可分两次离心。

7  加入500 µl溶液PE。12,000 rpm离心1min，弃滤液。

   注：溶液PE初次使用前用无水乙醇按1: 4稀释，即含80%乙醇。

           此步骤的作用是将硅胶膜上吸附的蛋白、盐等杂质洗脱，以获得高质量DNA片段。

8  加入500 µl溶液PE。12,000 rpm离心1min，弃滤液。

9  12,000 rpm离心 3min，以彻底去除纯化柱中的液体。

   注：此步骤的作用是去除残留乙醇，避免残留乙醇影响后续酶促反应。同时也利于DNA片段的充分溶解。

10 将离心柱置于新的1.5 ml离心管中。向纯化柱的ZY处，悬空滴加30-100 µl溶液Eluent（60℃预热），静置2min。12,000 rpm 离心1min，管底即为目的

DNA片段。贮存于-20℃。

   注：溶液Eluent可用无菌双蒸水代替，但其pH需为8.0-8.5，加入体积视DNA目的片段的多少、用户对目的片段浓度要求而定。

           对溶液Eluent 60℃预热，会提高提取DNA目的片段的产量。

 

注意事项

1  电泳时请使用新鲜配制的TAE或TBE电泳缓冲液，以免影响电泳及回收效果。

2  如果回收的片段较小、胶体积估计不准等因素导致回收率低，可适当增加溶液N体积至1-1.5倍。

3  回收小于100 bp 及大于10 kb 的DNA 片段时，应适当加大溶胶液的体积，延长吸附和洗脱的时间。

4  本试剂盒纯化柱的DNA吸附能力强。如果DNA浓度小，或DNA初始量少，回收率将会偏低。

5 所有离心步骤均为使用常规台式离心机室温下进行离心，速度为12,000 rpm（约13,400×g）。

6 溶液 Eluent（10 mM Tris-HCl, pH 8.5）中不含EDTA，其收集的DNA片段可直接用于各种酶促反应等，不会影响后续试验。

 

DNA 浓度及纯度检测

1  回收得到的DNA 片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。DNA 应在OD₂₆₀ 处有显著吸收峰， OD260 值为1 相当于大约50 μg/ml 双链

DNA、40 μg/ml 单链DNA。

2  OD_260/280比值应为1.7–1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用去离子水，比值会偏低，因为pH 值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。