番茄转基因 在利用农杆菌进行转基因研究中遇到的主要问题是如何提高转化率。影响转化率的因素主要有转化所用的农杆菌的柱形,质粒的构建,外植体的再生率。筛选标记的可靠性。以及转化过程中外部环境的控制。其中前几个因素在转化研究确立后很难有大的调整和改变。而转化的外部环境可以按照作者根据实际情况和主管需求做出较大调整。
材料和方法
材料:本研究中所用农杆菌菌株为LBA 4404.表达载体为PBI 121.并与所要转化的NR基因构建的PBI—NR,所用植物材料为春丽番茄。
方法:
1:农杆菌侵染时有效浓度的筛选,将用于转化的农杆菌单菌落接种到含抗性标记的YEB液体培养基中。28度于摇床上过夜培养,待其OD值为0.6时。分别以其稀释0倍。20倍液处理侵染番茄子叶外植体。将处理后的外植体分别放在含有卡那霉素的分化培养基上进行转化芽的筛选。每处理约20片外植体,10次重复。
2:番茄植株侵提液欲处理;
3:生长素欲处理
4:欲培养
5:DNA分子交叉;
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