重组蛋白 A 琼脂糖凝胶

品  名	重组蛋白A 琼脂糖凝胶FF
英文名	Recombinant Protein A NUPharose Fast Flow, rProtein A NUPharose FF
目录号	NRPB01L、NRPB01S(预装柱)
规  格	20 ml，100 ml，1 L，1 ml预装柱，5 ml预装柱，10 ml预装柱，特殊规格订制
运  输	2 ~ 25℃，常压、避光
贮  存	20%乙醇，2 ~ 8℃
保质期	3 年

 
相关介绍：
蛋白A是一种金黄色葡萄球菌细胞壁蛋白质，包含有5个区域，可以同IgG的Fc片段结合。作为一个亲和配基，蛋白A能够比较紧密地偶联到NUPharose上，使得这些区域可以同游离的IgG自由结合。一分子的蛋白A可以结合两分子的IgG。
 
技术指标：

基质	4%高度交联琼脂糖凝胶
配基	重组蛋白A
配基密度	≥ 6 mg/ml
填料粒径	60 ~ 180 μm
流速	800 cm/h
推荐流速	20 ~ 100 cm/h
pH稳定性	pH 3 ~ 9
耐反压	0.3 MPa
载量	≥40 mg/ml IgG

抗体与蛋白A、蛋白G的结合力：

种类 Species	亚型 Antibody Class	蛋白A Protein A	蛋白G Protein G
人 Human	IgG1 IgG2 IgG3 IgG4 IgM IgD IgA Fab	+++ +++ + +++ + - + +	+++ +++ +++ +++ - - - +
小鼠 Mouse	IgG1 IgG2a IgG2b IgG3 IgM	+ +++ +++ +++ -	++ +++ +++ +++ -
大鼠 Rat	IgG1 IgG2a IgG2b IgG2c	+ - - +++	++ +++ + +++
牛 Cow	IgG1 IgG2	+ +++	+++ +++
山羊 Goat	IgG1 IgG2	+ +++	+++ +++
马 Horse	IgG(ab) IgG(c) IgG(T)	+ + -	- - +++
兔Rabbit	IgG	+++	+++
猪Pig	IgG	+++	+
狗Dog	IgG	+++	+
鸡Chicken	IgY	-	-

注：-表示不结合；+表示微弱结合；++表示中等结合；+++表示很强结合。
 
应用举例：
结合缓冲液：20 mM磷酸缓冲液，150 mM NaCl，pH 7.4
洗脱缓冲液：0.1 M柠檬酸缓冲液，pH 4.0
中和缓冲液：1 M Tris ~ HCl，pH 9.0

• 1 ml重组蛋白A琼脂糖凝胶预填柱用5 ~ 10个柱床体积的蒸馏水洗去保存液；
• 用结合缓冲液结合缓冲液平衡 5 ~ 10个柱床体积；
• 将5 ml兔多抗血清用结合缓冲液稀释到50 ml，0.45 μm滤膜过滤上样；
• 用结合缓冲液再洗 5 ~ 10个柱床体积；
• 用洗脱缓冲液洗脱抗体，收集洗脱峰，并用中和缓冲液调节其pH至中性；
• 每次使用后用3 ~ 5个柱床体积的0.1 M 柠檬酸缓冲液（pH 3.0）再生清洗；
• SDS-PAGE（图1）电泳分析洗脱下来的兔多抗纯度在95%以上。

注意事项：

• 预填柱使用简易方便，在没有仪器设备的条件下也可以完成纯化任务。
• 样品洗脱后一般pH很低，应立即用碱性中和缓冲液（如1 M Tris-HCl，pH 9.0）将收集到的抗体溶液中和到中性，或在收集容器中事先装5% ~ 20%、pH 7 ~ 9的缓冲液（如1 M Tris-HCl或1 M 磷酸缓冲液），以利于维持抗体的生物活性，避免抗体失活。
• 使用时保证柱子和缓冲液的温度一致，避免柱床内产生气泡，影响纯化效果，如果已经产生气泡，可以自行重装柱子。
• 通常（每次）目标样品洗脱后应继续用0.1 M柠檬酸缓冲液（pH 2 ~ 3）洗3 ~ 5个柱体积，然后用平衡缓冲液清洗5个柱体积以上，作简易再生。
• 使用数次后应进行在位清洗，建议用0.1% Triton X-100 37℃洗1 ~ 3个柱体积（10 ~ 30 min），立即用平衡缓冲液清洗5个柱体积以上；或70%乙醇洗5个柱体积以上（可保持4 ~ 16 h），再用平衡缓冲液清洗5柱体积以上。在位清洗能去除强疏水性蛋白质和脂类，恢复柱子的载量和流速。
•  

推荐流速
预装柱体积	1 ml	5 ml	10 ml
流速(ml/min)	0.2	1	2