NCI-H3255人肺癌细胞| NCI-H3255细胞

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细胞名称： NCI-H3255人肺癌细胞| NCI-H3255细胞

组织来源：人肺
培养条件：DMEM +10% FBS 
形 态：贴壁

 NCI-H3255人肺癌细胞难以消化原因和解决方法：

可能原因1：消化液太弱了。

解决方法：增加酶的浓度或添加EDTA。另外可以尝试在37°C进行消化以增强酶的活性。

可能原因2： 培养液中含有YZ剂（例如血清为胰酶的YZ剂）可使消化液中的酶失活。

解决方法：在加入消化液前，用DPBS将细胞多洗涤几遍。

可能原因3： 细胞长满了并且很长时间没有得到及时处理，以至于细胞间连接非常紧密从而使消化液渗透不到培养容器与细胞的接触面。

解决方法：在细胞达到完全汇合前进行传代。

 NCI-H3255人肺癌细胞| NCI-H3255细胞周期检测步骤：

1. 细胞样品的准备：

    收集细胞，用1ml预冷PBS洗1遍，轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，避免细胞成团。

2. 细胞固定：

    加入1ml预冷的70%乙醇中，轻轻吹打混匀，4度固定2小时或更长时间（固定12-24小时可能效果更佳）。1000g离心3-5分钟，沉淀细胞（如果细胞沉淀不充分，可以适当延长离心时间或加大离心力）。弃上清，用用1ml预冷PBS洗1遍。

3. PI染色：

    每个样品用0.5ml染色缓冲液（或PBS）重悬，加入25ul PI染色液（20×）、10ul RNase A（50×）。37度避光温浴30分钟。

4. 流式检测：

    用流式细胞仪在激发波长488nm波长处检测红色荧光，同时检测光散射情况。采用分析软件进行细胞DNA含量分析和光散射分析。

做细胞实验的同学看过来。原装ATCC细胞现货来啦。 

选择上海素冉生物细胞有3个理由：

1、细胞状态好，形态佳，易成活，是市面上比较好养的细胞之一;

2、物流迅速，复苏好后发货，次日就能到;

3、使用我司推荐的进口品Pai血清进行培养实验，效果更佳。

专业技术人员李工收藏的细胞培养小技巧:

1. 买细胞要去靠谱的地方买，比如 ATCC 或者素冉生物。一般上面会有针对细胞的介绍，这样培养之前可以了解细胞正常生长的状态图、传代、培养基的类型等。

2. 不管是买的细胞，还是别人惠赠的细胞，刚拿到手赶紧的做两件事：检测是否有支原体污染;迅速扩增冻存，冻存细胞复苏后第二天蕞好更换一次培养基。

3. 发现细胞有污染迅速处理掉，特别是当你养了很多种细胞时。细菌污染、真菌污染很容易发现，支原体污染的话，细胞会长的慢，可以买个支原体检测的试剂盒定期检测一下。

4. 不同细胞生长周期不同。有的生长很快，比如说 MDA-MB-231，传代的时候取离心悬液的十分之一就已经足够了。有的又是特别慢，比如 BT474，传代是一分二，复苏起始的时候两周多才能长满。这就需要要在培养细胞的过程中多多摸索。

5. 对于娇弱的细胞，就得细心呵护。胰酶消化不能过久，吹得时候要轻柔，离心时候也要注意转速和时间。每天都要去看一下细胞，肉眼观察培养基状况、显微镜下观察细胞生长状况。记住，是每天。

细胞培养常见问题及解决方法

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，通过低温保藏储备一些细胞，以防支原体大面积来袭。如果支原体有抬头的迹象，或常规检测呈阳性结果，那么Z可靠的补救措施是扔掉所有培养物，清洁培养箱和超净台，一切从头开始。当然，你得确保储备的细胞是不含支原体的。