免疫组化

 一、病理学实验服务      病理学研究主要是将部分有病变的组织或脏器经过各种化学品和埋藏法的处理，使之固定硬化，在切片机上切成薄片，粘附在玻片上，染以各种颜色，供在显微镜下检查，以观察病理变化，作出病理诊断，为临床诊断和ZL提供帮助。二、软拓生物免疫组化服务       免疫组化是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，组织切片或细胞标本中的抗原先和一抗结合，再利用一抗与标记生物素、荧光素等的二抗进行反应，前者再用标记辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶（AKP）等的抗生物素（如链霉亲和素等）结合，通过呈色反应或荧光来显示细胞或组织中化学成分，在光学显微镜或荧光显微镜下可清晰看见细胞内发生的抗原抗体反应产物，从而能够在细胞爬片或组织切片上原位确定某些化学成分的分布和含量。
      软拓生物可以根据客户需求，进行免疫组化检测，提供高质量免疫组化染色和分析结果。如：肿瘤相关基因的耐药、预后、癌基因、抑癌基因，有关糖尿病各种蛋白的表达，正常、变异神经细胞的表达等其它基础研究领域的免疫组化检测。
 三、技术步骤1、切片制备
(1) 洗载玻片:将载玻片置于重铬酸钾和浓H2SO4混合液中侵泡，然后置于清水中清洗，再将载玻片浸泡于酒精之中，然后置于37°C温箱中，将多聚赖氨酸涂布于玻片的表面。
(2) 包埋组织:  
(3) 切片：切片的厚度一般为5μm,将 完整组织的载玻片置于40°C温水中。
(4) 捞组织：每张载玻片上通常捞两份组织，做对照使用，而且捞载玻片的时候Z好方向一致，放入37°C温箱中烘干。用载玻片捞组织时，一般取载玻片的下1/3或者下1/2一般每种组织捞5-6张，其中2-3张是备用的。
(5) 脱蜡：依次将载玻片放入二甲苯-二甲苯-酒精-酒精-95%酒精-90%酒精-80%酒精-70%酒精。
2、染色流程
  (1) 抗原修复：脱蜡后清水冲洗，加入3%H₂O₂浸泡10min，除去内源性过氧化氢酶，然后倒掉H₂O₂，  在清水中洗两次，再加入柠檬酸缓冲液，放入微波炉中蒸煮3min（中火），沸腾即可，冷却至室温，然后再蒸煮一次，冷却至室温。
  (2) 血清封闭：将柠檬酸缓冲液倒掉，水洗2次，并将载玻片置于PBS中5min，洗2次，擦干组织周围的PBS液，马上加上血清，封闭一些非特异性的位点，然后放入37°C温箱中半小时。
  (3) 加一抗：取片，擦干组织周围的血清，加一抗，4°C冰箱中保存过夜。
  (4) 加二抗：取片，放入PBS中洗3次，每次5min，擦干组织周围的PBS，加上二抗,然后置于37°C温箱中半小时。
  (5) 加SABC: 取片, 放入PBS中洗3次，每次5min，擦干组织周围的PBS，加上SABC,然后置于37°C温箱中半小时。
  (6) 加显色剂：取片, 放入PBS中洗3次，每次5min，擦干组织周围的PBS，加上显色剂。（显色剂的配置：在1ml水中加1滴显色剂A，摇匀，然后加1滴显色剂B，摇匀，再加1滴显色剂C，摇匀） 
  A：DAB B：H₂O₂ C：磷酸缓冲液
  (7) 复染：将显色后的片子用清水冲洗一段时间后，浸泡于苏木精中染色，一般动物组织为半分钟，植物组织3-5min。
  (8) 脱水：将复染后片子冲洗后，依次将载玻片放入70%酒精-80%酒精-90%酒精-95%酒精-酒精-酒精-二甲苯-二甲苯。
  (9) 封片：用中性树胶滴在组织旁边，再用盖玻片盖上，要先放平一侧，然后轻轻放下另一侧，以免产生气泡，封好片子后置于通风柜中晾干。四、注意事项      客户可以提供相应的组织切片、细胞爬片等，也可提供细胞或组织，提供组织时需提供尽量多的新鲜样品（组织：10-20mg米粒大小或直接提供≥1立方厘米大的石蜡样本），样本需-20℃保存。新鲜样品立即存于液氮或-80℃保存不超过一个星期。一抗连同抗体说明书由客户提供，也可由本公司提供或帮忙购买。五、服务说明：  (1) 免疫组化染色实验涉及的试剂可由客户提供，也可查看公司的产品库，亦可由我们代购；
  (2) 动物模型可由客户提供也可由我们代理建立