microRNA实时荧光定量PCR（qPCR）技术服务

1. 服务简介

      microRNA是一类大小约为22个碱基的小RNA分子。它们在转录后阶段对基因表达进行调控。调控机制是通过与靶基因的mRNA互补序列结合，YZ蛋白质的翻译或降低mRNA的稳定性，从而YZ靶基因的表达。microRNA在细胞的发育，分化，生长等生命活动中起着重要调控作用。
      江苏楚天生物采用 SYBR Green I 实时荧光定量PCR方法对您感兴趣的miRNA进行相对定量。客户只需提供样品，我们即可提供基因表达定量结果。
 
江苏楚天生物第三代 miRNA 检测技术

       miRNA 由于自身结构较为特殊，片段长度较短（约为 22 个碱基），无法直接应用 PCR 技术进行扩增。针对该特性，必须要延伸目标 miRNA 的长度，构建一个足够长的 PCR 模板。目前使用较多的方法为 PolyA 加尾法和通用型茎环引物法。加尾法可以检测到成熟 miRNA 及 pre-miRNA，特异性稍低；茎环法只针对成熟 miRNA，特异性相对较高。
       但是目前越来越多的实验发现，在检测目的miRNA时，通用型茎环引物并不适用于所有miRNA，并且在加入无模板中反应后，会发现实验本地过高，造成一定的实验误差。
       江苏楚天生物（CT Bioscience）通过持续的研发工作，已升级到第三代 miRNA 检测方法——即为每个 miRNA 都设计专门的反转录茎环引物，大大增强检测效果。我们的 miRNA PCR 芯片采用 SYBR Green I 实时荧光 PCR 进行准确定量，并根据不同 miRNA 的功能特性，研发出ZT应用的 miRNA PCR 芯片。在楚天生物独特的体系设计下，使得所有 miRNA 可以在统一的条件下GX扩增。
 


主要特点：
1. 为每个miRNA都设计专门的反转录茎环引物，解决了一种通用的茎环引物难以匹配所有miRNA的问题，以及miRNA分析相互干忧的问题，并且极大程度降低本底，提高准确性；
2. 优化反应条件，大大缩短检测时间，约1个小时即可在Roche 480 II上完成实验检测；
3. 提高检测灵敏度，线性范围高达10⁶，应用低至50 ng exosome提取的总RNA，也能得到较好的实验结果！


2. 接受样品类型

a) 组织样品（需提供≥100mg组织。必须保存在RNAlater或类似RNA保护溶液中）；
b) 体外培养细胞（需提供≥10^6个细胞。必须保存在RNAlater或类似RNA保护溶液中）；
c) 全血（需提供≥2ml全血）；
d) 总RNA（需提供≥5ug total RNA）；
e) 其他样品，请来电或邮件咨询。
 
      所有类型样品必须用冰袋或干冰寄至公司。冰袋或干冰应足量，以确保样品寄至公司时，冰袋或干冰未完全融化。使用invitrogen品PaiTRIzol试剂，按以上指导方法邮寄样品，3天内不会影响RNA质量。
 

3. 服务内容

① 引物设计与合成    由江苏楚天生物提供实验所需引物；
② RNA抽提纯化    在组织或细胞样品中加入TRIzol试剂（invitrogen），匀浆或裂解后抽提RNA；
③ 基因组DNA消化处理  使用DNA消化液消化基因组残余DNA，程度降低实验干扰；
④ RNA质量检测    使用Denovix DS-11超微量分光光度计测定样本RNA浓度和纯度；
⑤ cDNA合成      使用江苏楚天生物专利开发的反转录试剂盒（含有针对每个miRNA专配的反转录茎环引物），将miRNA反转录为cDNA；
⑥ 实时荧光定量PCR检测   加入cDNA和反应液，在Roche 480 Ⅱ中进行扩增和检测；
⑦ 提交实验数据和报告     服务报告提交下列数据：实时荧光定量PCR扩增曲线；熔解曲线；基因表达定量结果分析，图表等。
 

4. 服务价格
 

服务名称	具体内容	价格
microRNA 实时荧光定量PCR检测	提供实时荧光定量PCR扩增曲线，熔解曲线，分析报告等	35元/孔位

 
5. 服务报告提交时间
      收到样品后10-15个工作日。
 

欢迎登陆江苏楚天生物科技有限公司官方网站：www.ctbioscience.com 查询信息！或与我公司销售人员直接联系，咨询电话 0519-89886883！