单克隆抗体制备服务（多种套餐可选择）
- 型号：中国
- 供应商：上海荣圣生物科技有限公司
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产品库
| 阶段Ⅰ：免疫和ELISA检测 | 周期：8~10周 |
| 偶联：客户提供的蛋白质或多肽与载体蛋白（如KLH）偶联，需要约4mg蛋白质免疫原或5~10mg的多肽 免疫：免疫5只Balb/c小鼠并通过标准程序加强免疫 检测：尾部采血ELISA检测 | |
| 阶段Ⅱ：融合和筛选 | 周期：4~8周 |
| 融合：显示出免疫应答的两只小鼠的脾细胞与瘤细胞进行细胞融合 增殖和筛选：得到的杂交瘤细胞通过增殖和ELISA筛选得到GX价的克隆 | |
| 阶段Ⅲ：亚克隆与交付 | 周期：4~6周 |
| 亚克隆：通过有限稀释法对2-5个阳性母细胞进行亚克隆并鉴定亚类 交付：一般提供2个亚克隆，每个亚克隆提供1瓶细胞和5ml培养上清。根据客户需求至多可提供5个亚克隆，也可提供附加母细胞的子克隆，需要客户额外支付费用 | |
| 总计：4~6月 | |
| 阶段Ⅰ：多肽合成 | 周期：3~4周 |
| 合成20mg 15 mer的多肽，纯度达到90%，免费交付客户5mg未偶联多肽 | |
| 阶段Ⅱ：免疫和ELISA检测 | 周期：8~10周 |
| 偶联：合成的蛋白或多肽与载体蛋白（如KLH）偶联 免疫：免疫5只Balb/c小鼠并通过标准程序加强免疫 检测：尾部采血ELISA检测 | |
| 阶段Ⅲ：融合和筛选 | 周期：4~8周 |
| 融合：显示出免疫应答的两只小鼠的脾细胞与瘤细胞进行细胞融合 增殖和筛选：得到的杂交瘤细胞通过增殖和ELISA筛选得到GX价的克隆 | |
| 阶段Ⅳ：亚克隆与交付 | 周期：4~6周 |
| 亚克隆：通过有限稀释法对2-5个阳性母细胞进行亚克隆并鉴定亚类 交付：一般提供2个亚克隆，每个亚克隆提供1瓶细胞和5ml培养上清。根据客户需求至多可提供5个亚克隆，也可提供附加母细胞的子克隆，需要客户额外支付费用 | |
| 总计：5~7月 | |
| 阶段Ⅰ：多肽合成 | 周期：3~4周 |
| 合成10mg磷酸化多肽和5mg非磷酸化多肽（15残基，纯度90%），交付给客户5mg修饰多肽、3mg未修饰多肽和抗体产品 | |
| 阶段Ⅱ：免疫和ELISA检测 | 周期：8~10周 |
| 偶联：合成的修饰多肽与载体蛋白（如KLH）偶联 免疫：免疫10只Balb/c小鼠并通过标准程序加强免疫 检测：尾部采血并用磷酸化和非磷酸化多肽进行ELISA检测 | |
| 阶段Ⅲ：融合和筛选 | 周期：4~8周 |
| 融合：将阶段Ⅰ对磷酸化多肽显示出免疫应答的小鼠的脾细胞与瘤细胞进行细胞融合 增殖和筛选：用磷酸化多肽和非磷酸化多肽对杂交瘤细胞进行ELISA检测，在24孔板上扩增检测结果呈阳性的所有克隆。挑选ELISA效价且对磷酸化多肽特异性反应的克隆进行亚克隆 | |
| 阶段Ⅳ：亚克隆与交付 | 周期：4~6周 |
| 亚克隆：用磷酸化和非磷酸化多肽对杂交瘤细胞进行ELISA检测。通过有限稀释法，对2-5个阳性母细胞进行亚克隆，亚型测定阳性上清，对每个母细胞克隆扩增和冻存两个子克隆 交付：一般交付两个亚克隆，每个亚克隆提供2瓶冻存的细胞或者1瓶活细胞及5ml培养上清。根据客户需求根据客户需求至多可提供5个亚克隆，也可提供附加母细胞的子克隆，需要额外支付费用 | |
| 项目 | 备注 | |
| 动物 | 至多5只Balb/c小鼠或3只大鼠 | |
| 弗氏佐剂 | 加弗氏完全佐剂进行初免，然后除终免外都加弗氏不完全佐剂进行免疫 | |
| 免疫原 | 每只小鼠/大鼠每次注射10~50ug蛋白或多肽偶联物 | |
| 免疫 | 免疫原用无菌盐水稀释并与佐剂混合，腹腔注射抗原与佐剂彻底混匀后形成的稳定乳状液，在免疫原提供持续的免疫应答基础上进行加强免疫 | |
| 周期 | 第1天 | 采血0.2ml（获得0.1ml免疫前血清） 次免疫（抗原加弗氏完全佐剂） |
| 第14天 | 第二次免疫（抗原加弗氏不完全佐剂） | |
| 第21天 | 采血和ELISA检测 | |
| 第35天 | 第三次免疫（抗原加弗氏不完全佐剂） | |
| 第42天 | 采血和ELISA检测 | |
| 第56天 | 第四次免疫（抗原溶于PBS或盐水） | |
| 第61天 | 细胞融合 | |
| 细胞融合 | 用目标抗体和无关的阴性对照抗体分别进行ELISA检测。用显示出预期免疫应答的小鼠进行细胞融合 | |
| 扩增及筛选 | 融合细胞96孔板培养，ELISA筛选阳性克隆 | |
| 亚克隆 | 阳性克隆用有限稀释法亚克隆并鉴定亚类。稳定的单克隆杂交瘤细胞用培养瓶扩增并冻存 | |
| 交付 | 交付包括2瓶冻存的细胞或者每克隆提供1瓶活细胞及5ml培养上清 | |
| 项目 | 备注 |
| 承诺 | 提供两个磷酸化多肽（与非磷酸化多肽交叉反应低于30%）ELISA检测阳性克隆，金斯瑞提供多肽设计并保证质量。 |
| 多肽合成 | 我们将合成10mg磷酸化多肽和5mg非磷酸化多肽（15残基，纯度90%）。交付给客户5mg修饰多肽、3mg未修饰多肽和抗体产品。 |
| 阶段I：免疫和ELISA检测 | 偶联：修饰多肽被偶联到载体蛋白上（如KLH） 免疫：免疫10只Balb/c小鼠，并通过标准免疫程序加强免疫 检测：尾部采血，并用磷酸化和非磷酸化多肽进行ELISA检测 |
| 阶段II：融合和筛选 | 融合：将阶段I对磷酸化多肽显示出免疫应答的小鼠进行脾细胞融合 增殖与筛选：用磷酸化多肽和非磷酸化多肽对杂交瘤细胞进行ELISA检测，在24孔板上扩增检测结果呈阳性的所有克隆。挑选ELISA效价且对磷酸化多肽特异性反应的克隆进行亚克隆 |
| 阶段III：亚克隆与交付 | 亚克隆：用磷酸化和非磷酸化多肽对杂交瘤细胞进行ELISA检测。通过有限稀释法，对至多5个的阳性母细胞进行亚克隆，亚型测定阳性上清，对每个母细胞克隆扩增和冻存两个子克隆 交付：每个亚克隆提供2瓶冻存的细胞或者1瓶活细胞及5ml培养上清。根据客户需求也可提供附加母细胞的子克隆，需要额外支付费用 |
| 运输 | 干冰运输 |
| 周期 | 多肽合成：3-4周 阶段I：8-10周 阶段II：4-8周 阶段III：4-6周 总计：5-7月 |
| 项目 | 备注 | |
| 动物 | 10只Balb/c小鼠或6只大鼠 | |
| 弗氏佐剂 | 加弗氏完全佐剂进行初免，然后除终免外都加弗氏不完全佐剂进行免疫 | |
| 免疫原 | 客户提供10mg或10mg以上纯化抗体。胃蛋白酶消化目标抗体，生产高纯度的F(ab')2片段作为免疫原，筛选杂交瘤细胞 | |
| 免疫 | 免疫原用无菌盐水稀释并与佐剂混合，腹腔注射抗原与佐剂彻底混匀后形成的稳定乳状液，在免疫原提供持续的免疫应答基础上进行加强免疫 | |
| 周期 | 第1天 | 采血0.2ml（获得0.1ml免疫前血清） 次免疫（抗原加弗氏完全佐剂） |
| 第14天 | 第二次免疫（抗原加弗氏不完全佐剂） | |
| 第21天 | 采血和ELISA检测 | |
| 第28天 | 第三次免疫（抗原加弗氏不完全佐剂） | |
| 第35天 | 采血和ELISA检测 | |
| 第42天 | 第四次免疫（抗原溶于PBS或盐水） | |
| 第47天 | 细胞融合 | |
| 细胞融合 | 采集血清样品，用目标抗体和无关的阴性对照抗体分别进行ELISA检测。用显示出预期免疫应答的小鼠进行细胞融合 | |
| 扩增及筛选 | 96孔板培养融合细胞，用目标抗体和无关的阴性抗体进行ELISA检测，筛选阳性克隆，转入24孔板培养并鉴定亚类 | |
| 亚克隆 | 阳性克隆用有限稀释法亚克隆至形成稳定的单克隆杂交瘤细胞。每个母细胞的两个亚克隆细胞株用培养瓶扩增，每个亚克隆细胞株冻存4~6支 | |
| 鉴定 | 对阳性培养上清中获得的抗体进行亚类，相关反应性，特异性，抗原中和反应性和抗体配对等鉴定 | |
| 交付 | 交付包括2瓶冻存的细胞或者每克隆提供1瓶活细胞及5ml培养上清 | |
