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支原体检测试剂盒

产品信息
  • MycoplasmaFree支原体检测试剂盒说明书
    • 产品信息
    产品名称 产品编号 产品规格 储存条件
    MycoplasmaFree支原体检测试剂盒 FBMC002 10 rxns -20 ℃
    MycoplasmaFree支原体检测试剂盒 FBMC003 20 rxns -20 ℃
    MycoplasmaFree支原体检测试剂盒 FBMC004 50 rxns -20 ℃
    • 产品描述
      细胞培养是一个动态的连续过程，细胞通常会对操作失误或污染物有所反应，这些反应往往表现出不正常的细胞状态或培养基外观。如果受到支原体污染时，细胞形态较之无明显变化，极易被忽视，往往直到污染非常严重时才能发现。受污染的细胞膜上可能有几百个支原体，这些支原体竞争营养并释放有毒的代谢产物，严重影响实验结果。
    研究表明，至少二十多种支原体能污染细胞，其中Z常见的有：口腔支原体、精氨酸支原体、猪鼻支原体、发酵支原体、人型支原体、唾液支原体、肺支原体等。培养细胞的支原体污染率在4%-92%不等，其污染来源包括工作环境、操作者本身（一些支原体是人体的正常菌群）、培养基、血清、细胞交叉污染、实验器材和用来制备细胞的原始组织或器官的污染。
    Fubio支原体检测试剂盒主要采用PCR方法对各种生物材料（如细胞培养物、实验动物分泌物、动物血清等）支原体感染的检测。本试剂盒综合了几个优势：灵敏、特异、快速并且可以用直接用细胞培养上清液检测。本制品通过PCR方法检测培养细胞等生物材料中的支原体，所用引物为根据支原体16S rRNA序列保守区域设计，只特异性扩增支原体DNA，检出灵敏度与特异性均较高。PCR扩增及电泳分析只需数个小时，操作方便简单。
    本试剂盒可检测所用的莱氏无胆甾原体、支原体、螺原体等120余种亚种。

     
    • 产品组分
    组分名称 组分说明 规格
    Reaction Mix 酶、引物混合物 100μl/200μl/500μl
    Positive control 阳性对照 30μl /60μl/150μl
    Negative control 阴性对照 30μl /60μl/150μl
    Nuclease-Free H2O 无核酸水 500μl/1 ml/2.5ml
    • 运输与储存
    冰袋运输，收到产品后请于-20℃低温保存。
    • 保质期
    1年
     
    • 操作步骤
    1. 待检细胞样品准备
    (1)将待检细胞换成无抗生素的完全培养基，至少培养3天以上且融合度达70%-90%。
    (2)收集1ml细胞上清液， 1500 rpm离心5min , 取离心后的上,900µL转移到新EP管中再从900μL中吸取100μL留存备用。
    （3）将步骤（2）中900μl再次使用12000rpm离心10min，弃去上清，用50ul Nuclease-Free H2O重悬。
    （4）将步骤（3）中重悬样品用95'C:沸水浴中煮5min，用于支原体检测。

    2.PCR体系配制
    (1)按照下面PCR体系配置PCR预混体系(25µ1/反应）：
    体系组分 体积（每反应）
    Reaction Mix 10 μl
    样品/ control 3 μl
    超纯水 12 μl
      25μl
    注意：添加模板时，应减少空气流动，注意交叉污染；因PCR反应极其灵敏，为防止出现假阳性结果，建议加样时加阳参。
    (2) 加完所有待检样品后，振荡器上混匀，简短离心后，进行PCR扩增，反应程序如下：
    温度 94℃ 94℃ 60℃ 72℃ 72℃ 4℃
    时间 5 min 30 S 30 S 30 S 10 min ∞
    循环数 1 35 1 1

    3.PCR 产物的电泳检测
    (1)   配置1%的琼脂糖凝胶，稍冷后加入核酸染料 , 注入凝胶模中，冷却凝固后，即可用于电泳。
    (2)   在每管PCR产物中加入loading Buffer , 取8-10µL进行上样，Marker样5-10µL。
    (待) 电泳：130V电泳30min (根据电泳仪情况，适当调整时间）。
    (3)   电泳结束后取出凝胶千成像仪上抇照，并保存。
    4. 结果判断
    产物大小在370bp左右。



     
    • 注意事项
    1. 为了您的安全和健康，使用本品时请穿实验服，并配戴乳胶手套和口罩后操作。
    2. 实验时，试剂盒中的每种试剂在使用前应充分融化，并上下颠倒多次以充分混匀，请勿激烈振荡。
    3. 反应管中加好所有的试剂后，应尽快上PCR仪进行扩增，以免形成过多的二聚体。
    5结果异常时，建议复检。
    6结果为弱阳性时，建议将100μL留存上清继续培养3-4天，再次检测。
    本产品仅供科研用途！
     
    温馨提示：不可用于临床ZL。
    • 信息声明：本产品供应信息由仪器网为您整合，供应商为（上海复百澳生物科技有限公司），内容包括 （支原体检测试剂盒）的品牌、型号、技术参数、详细介绍等；如果您想了解更多关于 （支原体检测试剂盒）的信息，请直接联系供应商，给供应商留言！
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