4×蛋白上样缓冲液(非变性胶)北京厂家现货
- 品牌:百奥莱博
- 型号:RFT066-CDG
- 产地:北京
- 供应商:北京百奥莱博科技有限公司
- 供应商报价:¥120 - 1510
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名称:4×蛋白上样缓冲液(非变性胶)北京厂家现货
产地:国产|进口
英文名:4×Native-PAGE protein loading buffer
规格:10×1ml
品Pai:百奥莱博
本制品是蛋白质样品进行 Native-PAGE(非变性聚丙*(代"烯")酰胺凝胶)电泳用的上样 Buffer。制品中含有示踪色素*酚蓝,可以确认电泳的进行情况。使用本制品,蛋白质在电泳胶中可以得到很好地分离。电泳后用考马斯亮蓝或者银染色等方法染色后,蛋白质电泳带能够得到清晰显示。非变性蛋白质电泳时,蛋白质的迁移速度与其固有的分子量、分子的形状及所带的电荷量等有一定关系。
使用方法:
使用前,先离心快甩使溶液至管底,以防开盖后造成污染。
向6μl的蛋白质样品中加入本制品 2μl(本制品与蛋白质样品按照 1:3的体积比混合),振荡混匀后稍离心,即可上样电泳。本制品使用方便,可以根据蛋白质样品和电泳胶孔的体积,按照上述比例调整本制品的使用量。
注意事项:
1、为了您的安全,使用时请使用一次性手套操作,注意防护!
2、本制品不适用于变性聚丙*(代"烯")酰胺凝胶蛋白电泳。
储存条件:-20℃,避光。.jpg)
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·pUC18载体
编号:RFT117
英文名称:pUC18 vector
规格:2μg
pUC18载体适用于双脱氧法对DNA 片段进行测序,它克隆的DNA 片段比使用 M13 phage作载体时克隆的片段长。 由于在 lacZ 领域中含有多克隆位点, 因此可以在含有 IPTG、 X-Gal的平板培养基上通过蓝白筛选判断载体中有无 DNA 片段的插入。同时还可以通过载体上的lac promoter表达外源基因, 使用M13系列的通用引物对插入载体中的DNA片段进行测序。
贮存液:10 mM Tris-HCl(pH8.0) ,1 mM EDTA。
链长:2686 bp。
制备:使用 CsCl-EtBr 密度梯度超离心法纯化。
纯度:
1、含 70%以上的双链 Covalently closed circular DNA(RFI) 。
2、用双脱氧测序法确认多克隆位点。
3、确认 EcoR I,Sac I,Kpn I,Sma I,BamH I,Xba I,Sal I,Pst I,Sph I 和 Hind III只有一个酶切位点。
用途:
1、外源基因的克隆以及使用 lac 启动子进行表达。
2、使用 M13 系列引物进行 DNA测序。
储存条件:-20℃。
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·Top10化学感受态细胞
编号:RFT167
英文名称:Top10 Competent cell
规格:20×100μl
本公司生产的Top10感受态细胞采用经特殊工艺处理得到,可用于DNA的化学转化。使用pUC18质粒检测,转化效率可达108cfu/μg,-70℃保存几个月转化效率不发生改变。
基因型:F- mcrA △(mrr-hsdRMS-mcrBC) j80 lacZ△M15△?lacⅩ74 recA1 deoR araD139△(ara-leu) 7697 galU galK rpsL (StrR) endA1 nupG
特点:一种用于铺制与培养质粒平板和粘粒平板的重组缺陷的YZ型菌株。其j80 lacZ△M15基因的产物可与pUC载体编码的 b-半乳糖苷酶*基端实现a互补,可用于蓝白斑筛选。
操作方法:(以下操作均按无菌条件的标准进行)
1、取感受态细胞置于冰浴中,如需分装可将刚融化细胞悬液分装到无菌预冷的离心管中,置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl,可以根据实际情况分装使用。应注意所用DNA体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。以下实验以100μl感受态细胞为例。
2、向感受态细胞悬液中加入目的DNA(50μl的感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和),轻轻旋转离心管以混匀内容物,在冰浴中静置30分钟。
3、将离心管置于42℃水浴中放置45秒,然后快速将管转移到冰浴中,使细胞冷却2-3分钟,该过程不要摇动离心管。
4、向每个离心管中加入500μl 无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素), 混匀后置于37℃摇床振荡培养45分钟(150转/分钟),目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。
5、将离心管内容物混匀,吸取100μl已转化的感受态细胞加到含相应抗生素的SOB或LB固体琼脂培养基上,用无菌的弯头玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。将平板置于室温直至液体被吸收,倒置平板,37℃培养12-16小时。
注意:涂布用量可根据具体实验来调整。如转化的DNA总量较多,可取更少量转化产物涂布平板;反之,如转化的DNA总量较少,可取200-300μl转化产物涂布平板。如果预计的克隆较少,可通过离心(4,000 rpm, 2分钟)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。(涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少可以将剩下的菌液再涂布新的培养板)
注意事项:
1、感受态细胞应保存在-70℃,不可多次冻融和放置时间过长,以避免感受态细胞的转化效率。
2、进行转化操作时,应根据相应温度及无菌条件的要求进行。
3、为防止转化实验不成功,可以保留部分连接反应液,以重新转化,将损失降到。
储存条件:-70℃,有效期6个月。.jpg)
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