GE Biacore T200生物大分子分析系统

Biacore T200是一种万用的、无标记系统，它具有的灵敏度和的噪音。用于生物分子作用的详细分析，适用范围从早期药物开发研究到开发，直至质量控制。 系统提供高质量动力学、亲和性、浓度、特异性、选择性以及热动力学作用数据，这些分析均实时地、高灵敏度地完成。 此系统可以更高的精度和自信度完成动力学范围末端发生的相互作用分析。
推进无标记作用分析的检测限
Biacore T200 的灵敏度确保对Z小有机成分的精确亲和性分析，并且其分析功能可延伸到精确的动力值测定领域。 这样就可能先前获得的边界数据进行可靠的解释，从而完成对Z简便分析物的动力学分析，以及对低冗余度蛋白质的检测。
性能范围
Biacore T200 支持使用 96 孔和 384 孔微孔板以及试瓶。 由于同时使用四个流动池要，可同时对四种相互反应进行监测。 Biacore T200 的样本仓可冷却至 4°C，从而可在无人看护的情况下，对敏感型样本进行长达 48 小时的分析。
保证易用性的软件向导和模板
Biacore T200 软件适用于具有不同经验水平的用户。 软件向导在整个分析过程均可提供支持，从开发直至数据解读，简化了整个过程并缩短了获取结果的时间。
快速、简便的动力学分析
Biacore T200 软件提供了大量的工具，帮助用户进行自信且可靠的动力学分析。 这些分析可采用多周期法或单周期动力学分析法来完成。
 • 一个平台即可完成高质量的综合鉴定，包括动力学、亲和性、特异性、浓度以及热动力学的鉴定
 • 增进对分子机理以及结构-功能关系的理解
 • 定义潜在的药靶和诊断标记物
 • 选择和鉴定生物疗法候选药
 • 药物开发过程中选择和优化前导成分
 • 免疫原性研究中检测和鉴定耐药性抗体


（一）T200技术参数 

技术项目	参数
检测原理	表面等离子共振原理（SPR）
获取的信息	动力学、亲和力、特异性、活性浓度、热力学等
样品类型	从低分子量化合物到生物大分子如蛋白、多肽、DNA、RNA、多糖、脂类分子以及细胞及病毒，含DMSO等有机溶剂的缓冲液，血清及胞浆上清液等
结合速率常数(ka)	103-3X109 M-1S-1
解离速率常数(kd)	10-5-1 S-1
平衡常数(KD)	10-4-3.3X10-15 M
分析温度	4-45℃
分子量下限	对有机化合物无分子量限制
样品折射率范围	1.33-1.40
动态范围	1-70000
基线噪音	< 0.03 RU (RMS)
浓度测定	标准曲线法或CFCA法

  
（二）T200性能表现 
一、扩展非标记相互作用分析的检测极限 

图2 甲基磺酸(Mr 95)与碳酸酐酶的相互作用特性 
Biacore T200专为要求高灵敏度的分子间相互作用的分析而设计： 
1）小的有机化合物（无分子量限制） 
2）低丰度分子（浓度大于10pM） 
3）稀有或敏感的靶蛋白，如G蛋白偶联受体 
4）避免了分析与二价抗体之间相互作用时亲和效应的干扰 
5）微弱相互作用分析，K_D在mM范围内 
6）稳定的结合物，k_d≥10^-5 S^-1 
1、测定稀有或敏感靶蛋白 
从低水平捕获蛋白获取高质量数据有利于分析小分子和诸如G蛋白偶联受体等敏感蛋白的相互作用，而这些蛋白往往是Z重要的药物靶蛋白。而Biacore T200的高灵敏性意味着蛋白固定后仅需小部分分子保留活性即可用于分析。此外，稀有靶蛋白使用量较少，使得消耗降低的同时并不影响数据质量。敏感靶蛋白的研究因此更加可信，缩短了药物发现过程中的检测时间。 

图3 小分子黄嘌呤胺同源物（XAC）与组氨酸标记GPCR（STaRR）A2的结合。当使用低水平固定GPCR时，采用Biacore T200（右图）可生产质量优于Biacore T100（左图）的数据。 
2、分析方法设计更加灵活 
在评估抗体用作ZL、分析或诊断工具的适用性时，对抗原-抗体相互作用进行全面特征鉴定很重要。当利用Biacore进行抗原-抗体分析时，通常情况下建议将抗体固定于传感器表面以免其亲和作用（Avdity Effect）影响数据解读。然而，在特定情况下，人们更倾向于固定抗原，这是出于节约珍贵靶分子的考虑或抗原分子更易于固定。Biacore T200的高灵敏度足以降低抗原捕获水平以避免亲和效应，进而使得分析方法的设计可以灵活多样。 

图4 在抗原低捕获水平上（右图）分子间相互作用数据更适合1:1模型。从而以抗体为配体的相应动力学常数的计算更加精确、可靠。 
3、更广动力学范围内的高度精确性分析 
Biacore T200中的微流控系统经过优化以用于高质量的动力学分析。四个流动池可灵活用于单一的、配对的或者系列运行。配对的芯片上流动池接口使得流动池之间的空间被降到水平，确保了精确的标准差减。 
Biacore T200可以测定从Z快的结合速率到Z慢的解离速率的Z广范围内的动力学常数。这可用于对强结合物进行排序，这一点对于抗体筛选非常重要。此外还可以用于检测快速结合的相互作用物之间的差别，这在收到生物利用率限制的生物学过程的研究中非常重要。 
1）k_a从10³到5X10⁷M^-1s^-1（对于大分子待检物为10³到3X10⁹ M^-1s^-1） 
2）k_d从10^-5到1s^-1 

图5 从Z快结合速率到Z慢解离速率的范围内动力学参数测量。具有明显类似亲和力的相互作用具有极其不同的动力学特性。 
二、性能范围 
1、自动运行条件下可分析高达384种样品 
Biacore T200支持96和384孔板和小瓶的使用。四个流动池的使用使得四种相互作用可被同时检测。Biacore T200的样品槽可以降温到4℃，使得敏感样品可以在高达48小时无人值守的运行中得以分析。 
2、在生理温度下研究分子间相互作用来预测体内状态的情况 
通过提高在生理温度下测定的可靠数据，Biacore T200确保更加准确地预测体内状态下的ZL性分子的特性。系统一体的缓冲液除气装置防止在温度升高的情况下形成气泡，有助于确保更高质量的数据。此外，一体的除气装置也可以省略运行前对缓冲液进行的除气操作。