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感受态细胞DH 10β（100支），买100支再送100支

产品信息
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    DH 10    β Chemically Competent Cell
                                                                                                   

    ▶  产品规格

    Cat  No.      KTSM102S   （100 μl×50支）
                     KTSM102L   （100μl×100支）
    pUC19(control vector):  100pg/μl                       5 μl
    保存条件：                                                    -80℃
    保质期：                                                       6个月


    ▶   基因型

    F- mcrA ∆(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80lacZ∆M15 ∆lacX74 recA1 endA1 araD139 ∆(ara, leu)7697 galE15 galK rpsL nupG λ- 


    ▶   产品说明

    DH 10β菌株来源于MC1061菌株，消除了mcrA、mcrBC、mrr和hsdRMS的限制系统，使DH 10β感受态细胞适合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA，允许构建更多具有代表性的基因组文库。recA1和endA1的突变有利于稳定和高纯度质粒DNA的提取。rpsL赋予其链霉素抗性，φ80lacZ∆M15 的存在使DH 10β可用于蓝白斑筛选。DH 10β感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率>108cfu/μg DNA。


    ▶  操作方法


    一 、热激转化法
    1. 从-80℃冰箱取出感受态细胞冰浴融化后，吸取100μl感受态细胞转移到-20℃过夜预冷的摇菌管中，加入质粒或连接产物，轻轻混匀，冰浴30分钟。
    2. 42℃水浴热激60秒，迅速放回冰中并静置2分钟，该过程不要摇动摇菌管。
    3. 向摇菌管中加入900μl 37℃温浴的SOC或LB（SOC培养基可提高2-3倍转化效率），37℃、180rpm、45分钟复苏菌种。
    4. 根据实验要求（质粒，重组连接产物转化），吸取不同体积已转化的感受态细胞加到含相应抗生素的LB琼脂培养基上，将细胞均匀涂开。将平板置于37℃至液体被吸收，倒置平板，37℃过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少15小时。
     
    二 、10分钟快速转化法
                                
    注：在使用卡那霉素，四环素等作为筛选抗性时，需要在SOC培养基中复苏以提高转化效率，当使用氨苄青霉素作为筛选抗性时，该步骤可以省略。感受态细胞-DNA混合物在冰上孵育5-10分钟后加入4倍体积的37℃温浴的SOC培养基，在37℃ 180rpm孵育1小时，然后转移到37℃预热的LB培养基上。
    1. 提前15分钟将用到的筛选培养基平板拿到37℃预热。
    2. DH 10β感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA并用手拨打EP管底轻轻混匀，冰中静置5分钟。
    3. 用200μl枪将感受态细胞-DNA混合物转移到已经37℃预热的LB培养基上，涂均匀，表面无水渍。
    4. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少15小时。


    ▶   注意事项


    1. 刚刚化冻的细胞，转化效率。
    2. 避免反复化冻。 
    3. 避免移液枪吹吸。
    4. 整个操作过程要轻柔。
    5. 重组产物不建议用10分钟快速转化法。
     
    声明：本产品仅供科学研究使用，不能用于人、动物的YL或诊断程序，不能使用本产品作为食品、化妆品或家庭用品等。

     
    温馨提示：不可用于临床ZL。

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