小牛肠碱性磷酸酶(国产,进口)

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名称：小牛肠碱性磷酸酶(国产,进口)
品Pai：百奥莱博
产地：国产|进口
编号：SY0388
本品为小牛肠来源的碱性磷酸酶，可以降解几乎所有磷酸单酯，但是该酶不能水解磷酸二酯或磷酸三酯。Alkaline Phosphatase，中文名碱性磷酸酶，可将DNA、RNA的5’端磷酸基团去除，常用于阻止载体的自连作用：在分子克隆实验中，DNA连接酶催化DNA连接时需要有磷酸基团的存在，载体在经酶切后会在切点端保留一个磷酸基团。而载体经碱性磷酸酶去磷酸化后因5’ 端无磷酸基团，因而不可以和自身3’ 端连接。因此连接反应中载体本身会优先发生的连接反应被阻止，提高了目的片段插入率。另外，碱性磷酸酶还可制备用于5’端标记的DNA模板，以及用于该酶蛋白的脱磷酸作用等。

来源：携带小牛肠碱性磷酸酶表达质粒的酵母
质量控制（Quality Control）：无核酸外切酶、核酸内切酶、核糖核酸酶污染
热灭活（Thermal Inactivation）：在螯合剂存在下，65℃加热30min，99%活性不可逆丧失；使用苯酚，可使酶完全失活。
储存液条件（Storage conditions）：10 mM Tris-HCl (pH8.0), 1 mM MgCl2, 50mM KCl, 0.1 mM ZnCl2, 50% glycerol.
活性定义：在pH9.8, 37℃条件下，以对硝基苯酚磷酸盐(p-nitrophenylphosphate)为底物，1分钟生成1µmol硝基酚(p-nitrophenol)所用的碱性磷酸酶量定义为1个活力单位。
pH（Optimal pH）：该酶在底物浓度高的情况下其反应pH为10，在底物浓度低时，pH为8，此时该酶活性较高浓度底物时稍低。
优化体系（Optimal Buffer）：AP Buffer (500 mM Tris-HCl, pH9.0; 10 mM MgCl2)
储存条件：-20℃

使用方法:
1 DNA去磷酸化
① 在1.5ml离心管中加入下列试剂：
无菌ddH2O————Up to 50µl
DNA 片段*————1-20pmol
Alkaline Phosphatase————1-2µl
10×AP buffer————5µl
【*】：单链DNA或含5’端突出末端的DNA推荐低温下孵育，平末端DNA或含3’突出末端的DNA建议在较高温度下孵育。
② 混匀上述试剂，于37℃或50℃孵育30min。或者37℃孵育15min后，再于50℃孵育15min。

2 酚氯*(代"仿")法抽提DNA
① 苯酚/氯*(代"仿")/异戊醇（25:24:1）抽提2次。
【注】：推荐在酚提取前将其在含5 mM EDTA, 0.5% SDS ,50 μg/ml Proteinase K的溶液中56℃孵育30min以彻底灭活碱性磷酸酶。在酚提取前于75℃孵育10min，灭活效果更佳。
② 氯*(代"仿")/异戊醇（24:1）抽提。

3 乙醇沉淀DNA
① 加入2.5µl 3M NaCl(终浓度150mM).
② 加入125µl（2.5倍体积）预冷乙醇，混匀后于-20℃放置30-60min，沉淀DNA。

4 溶解DNA
离心，彻底去除乙醇后，将DNA溶于适量去离子水（＜20µl）。

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·髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG) (35-55)
编号：SY0437
英文名称：Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein(35-55)
规格：1mg
髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG) 是髓鞘膜和少突胶质细胞表面Z外层的膜蛋白，是导致多发性硬化（MS）脱髓鞘的关键成分，针对MOG的抗体能够在体内和体外造成脱髓鞘。MOG数量较少，约占髓鞘蛋白总量的0.01%-0.05%，具有高度免疫原性，它直接参与central nervous system (CNS)的体液免疫反应，是引起实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）中脱髓鞘的主要免疫靶点。MOG 35-55含21个氨基酸，是WY既能引起脱髓鞘抗体反应又能引起T细胞反应的神经系统髓鞘蛋白成分。MOG 35-55可在C57BL/6小鼠体内诱导MOG35-55/I-Ab特异性自身反应性CD4+T细胞异常活化，诱发EAE。

英文名称：Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein(35-55)
CAS No：149635-73-4
多肽序列：Met-Glu-Val-Gly-Trp-Tyr-Arg-Ser-Pro-Phe-Ser-Arg-Val-Val-His-Leu-Tyr-Arg-Asn-Gly-Lys (MEVGWYRSPFSRVVHLYRNGK)
分子式：C118H177N35O29S
分子量：2582.01
外观：白色粉末
纯度：98.68%
溶解性：溶于水（0.5mg/ml）
储存条件：-20℃


小牛肠碱性磷酸酶(国产,进口)关键词：小牛肠碱性磷酸酶,Alkaline Phosphatase (30 U/μl), Calf Intestine (CI,SY0388


·细胞凋亡检测试剂盒(Annexin V-FITC/PI)
编号：SY0471
英文名称：Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit
规格：20 rxn
Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒是用FITC标记了的Annexin V作为探针，来检测细胞早期凋亡的发生，可用荧光显微镜、流式细胞仪或其他荧光检测设备进行检测。

其检测原理为：在正常的活细胞中，磷脂酰丝氨酸（phosphotidylserine，PS）位于细胞膜的内侧，但在早期凋亡的细胞中，PS 从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面，暴露在细胞外环境中。Annexin-Ⅴ（膜联蛋白-V）是一种分子量为35-36KD的Ca2+ 依赖性磷脂结合蛋白，能与PS高亲和力结合。可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。

另外，本试剂盒中还提供了碘化丙啶（Propidium Iodide，PI）用来区分存活的早期细胞和坏死或晚期凋亡细胞。PI是一种核酸染料，它不能透过正常细胞或早期凋亡细胞的完整的细胞膜，但可以透过凋亡晚期和坏死细胞的细胞膜而使细胞核染红。因此，将Annexin V与PI联合使用时，PI 则被排除在活细胞（Annexin V-/PI-）和早期凋亡细胞（Annexin V+/PI-）之外，而晚期凋亡细胞和坏死细胞同时被FITC 和PI 结合染色呈现双阳性（Annexin V+/PI+）。

注意事项

1) 由于细胞凋亡是一个快速的过程，建议样品在染色后1小时之内进行分析。
2) 对于贴壁细胞，消化是一个关键步骤。贴壁细胞诱导细胞凋亡时如有漂浮细胞，需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色。处理贴壁细胞时要小心操作，尽量避免人为的损伤细胞。胰酶消化时间过短，细胞需要用力吹打才能脱落，容易造成细胞膜的损伤，PI摄入过多；消化时间过长，细胞膜同样易造成损伤，甚至会影响细胞膜上磷脂酰丝氨酸与Annexin V-FITC的结合。消化时将胰酶铺满孔板底后，轻摇时胰酶与细胞充分接触，然后倒掉大部分胰酶，利用剩余的少量胰酶再消化一段时间，待细胞间空隙增大，瓶底呈花斑状即可终止。在消化液中尽量不用EDTA，EDTA会影响Annexin V与PS的结合。
3) 实验中如需要固定细胞，比如在检测凋亡的同时检测细胞周期，只能选用Annexin V-FITC，而不能选用Annexin V-EGFP，因为在固定过程中EGFP会变性导致丧失激发荧光的能力。固定前需要先将细胞与Annexin V-FITC进行孵育，并用binding buffer洗掉未结合的Annexin V-FITC。因为固定过程中细胞通透性增加会产生细胞碎片，可以和Annexin V结合，对结果产生干扰。
4) 如果样品来源于血液，请务必除去血液中的血小板。因为血小板含有PS，能与Annexin V结合，从而干扰实验结果。可以使用含有EDTA的缓冲剂并在200 g离心洗去血小板。
5) 试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
6) Annexin V-FITC和PI是光敏物质，在操作时请注意避光。

储存条件：4℃，有效期一年。


小牛肠碱性磷酸酶(国产,进口)关键词：小牛肠碱性磷酸酶,Alkaline Phosphatase (30 U/μl), Calf Intestine (CI,SY0388

PY01-059  肌酸  10克  
2-(N-玛啡啉)乙磺酸钠盐 OFLX 71119-23-8
BTN101106 沉淀型TMB显色试剂盒 Precipitated TMB Chromogenic Kit
ARB12614 大鼠淋巴细胞功能相关抗原3(LFA-3/CD58)定量分析 Rat lymphocyte function associated antigen 3,lfa-3 ELISA KIT
504-17-6 2-Thiobarbituricacid β-硫代巴比*(代"妥")酸
PY08-047  HE琼脂 9CM  10皿/盒，用于分离肠道致病菌
ARB14163 大鼠流行性出血热(EHF)ELISA检测服务 
ARB11191 人降解加速因子(DAF)酶免分析 Human decay-acceleRating factor,daf ELISA KIT
BTN131118 乙烯乙二醇 Ethylene Glycol
ARB10680 人血管舒缓激肽(BK)ELISA检测服务 Human bradykinin,bk ELISA KIT
ARB13186 小鼠胰岛素样生长因子2(IGF-2)检测服务 Mouse insulin-like growth factor 2,igf-2 ELISA KIT
ARB13600 兔子补体片断3A(C3A)免费代测 Rabbit complement fragment 3a,c3a ELISA KIT
SJ0273 Ficoll 400   聚蔗糖400
BTN130613 9°Nm DNA聚合酶 9°Nm DNA Polymerase

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