细胞凋亡
细胞凋亡是指为维持内环境稳定,由基因控制的细胞自主的有序的死亡。细胞凋亡与细胞坏死不同,细胞凋亡不是一件被动的过程,而是主动过程,它涉及一系列基因的激活、表达以及调控等的作用,它并不是病理条件下,自体损伤的一种现象,而是为更好地适应生存环境而主动争取的一种死亡过程。
细胞凋亡是细胞的一种基本生物学现象,在多细胞生物去除不需要的或异常的细胞中起着必要的作用。它在生物体的进化、内环境的稳定以及多个系统的发育中起着重要的作用。细胞凋亡不仅是一种特殊的细胞死亡类型,而且具有重要的生物学意义及复杂的分子生物学机制。
凋亡是多基因严格控制的过程。这些基因在种属之间非常保守,如Bcl-2家族、caspase家族、癌基因如C-myc、抑癌基因P53等,随着分子生物学技术的发展对多种细胞凋亡的过程有了相当的认识,但是迄今为止凋亡过程确切机制尚不完全清楚。而凋亡过程的紊乱可能与许多疾病的发生有直接或间接的关系。如肿瘤、自身免疫性疾病等,能够诱发细胞凋亡的因素很多,如射线、药物等。
细胞凋亡检测意义
1、用于肿瘤细胞和组织在内的不同种类病理标本研究;
2、应用于临床诊疗,新药研制、生物制品开发、肿瘤放化疗、以及从促凋亡角度探索肿瘤的基因ZL;
3、对相关疾病的早期发现、放化疗的LX评价具有举足轻重的地位。
凋亡分析总体原则
1、因为凋亡是多因素、多通路参与的过程,不能根据单一指标来判断细胞凋亡,所以需进行多指标同时检测;
2、由于凋亡细胞不同时间出现的凋亡事件不同;而每个指征维持有一个时间段,所以需要在不同的时间点进行采样,以保证检测结果的准确性;
3、实验需要设定阳性和阴性对照,避免出现假阳性或者假阴性。
细胞凋亡检测方法
1、早期检测:磷脂酰丝氨酸在细胞外膜上的检测,细胞内氧化还原状态改变的检测,细胞色素C的定位检测和线粒体膜电位变化的检测。
2、晚期检测:TUNEL,LM-PCR Ladder (连接介导的PCR检测)和Telemerase Detection (端粒酶检测)
3、mRNA水平的检测:研究者们发现了很多在细胞凋亡时表达异常的基因,检测这些特异基因的表达水平也成为检测细胞凋亡的一种常用方法。
4、细胞凋亡的形态学检测:根据凋亡细胞固有的形态特征,人们已经设计了许多不同的细胞凋亡形态学检测方法:光学显微镜和倒置显微镜,荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜和透射电子显微镜观察。
5、流式细胞仪检测。