PI是一种溴化乙啶的类似物,能够与DNAQL结合,它在嵌入双链DNA后释放红色荧光。尽管PI不能通过活细胞膜,但却能穿过破损的细胞膜而对核染色。当PI与双股DNA结合时,吸收波长为535nm,发射波长为610nm。
操作说明: - 培养的单层细胞或孵育过荧光抗体的组织切片等。0.01mol/L PBS漂洗三次,每次5min。
- 加PI工作液,室温避光孵育10min(可根据实验材料的染色结果而定)。
- PBS漂洗三次,每次5min。
- 水溶性封片剂封片后荧光显微镜下观察。
结果:正常细胞一般不会被染上颜色,细胞发生凋亡时,细胞核呈红色荧光。如果细胞经破膜处理后再染色,所有细胞核均可看到红色荧光。
注意事项: - PI对人体有刺激性,操作时请穿实验服并带手套。
- 荧光染料都存在淬灭的问题,建议染色后尽量当天完成检测。
- 为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片剂封片,抗荧光淬灭封片剂可以向武汉谷歌生物订购。
温馨提示:不可用于临床ZL。