新城疫抗体检测试剂盒(阻断ELISA)

介绍
新城疫（newcastle disease,ND）抗体检测试剂盒用于检测禽类血清中的新城疫抗体，评估新城疫疫苗免疫状况及感染禽的血清学辅助诊断。
本试剂盒采用阻断ELISA法，可检测鸡、鸭、鸽子等禽类血清中的新城疫抗体。在酶标板条微孔上预包被新城疫抗原。在试验中，加入稀释后的待检血清，经过温育后，若样品中含有新城疫抗原特异性抗体，则与包被板上的抗原结合，经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后；再加入酶标记的抗新城疫抗体，样本中的抗体阻断了酶标抗体与包被板上抗原的结合；经洗涤除去未结合的酶结合物；在微孔中加入TMB底物液，经酶催化产生的蓝色信号与样本中的抗体含量成反比，加入终止液终止反应后，用酶标仪450nm波长测定反应孔中的吸光度A值。


组份

1	抗原预包被板条	1/2块	6	终止液	6/11ml
2	酶结合物	11/22ml	7	阴性对照	1/2ml
3	10倍浓缩洗涤液	50/100ml	8	阳性对照	0.5ml/1ml
4	显色液	11/22ml	9	封板膜	2/4张
5	样本稀释液	100ml	10	说明书	1份

需自备的设备及试剂
1. 微量移液器：10µl-100µl、100µl-1000µl。
2. 一次性移液器吸头。
3. 量筒：500ml。
4. 96孔板酶标仪。
5. 蒸馏水或去离子水。
6. 洗瓶或洗板机。


样品制备
取动物全血，按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血。


洗涤液的准备
浓缩洗涤液使用前应恢复至室温，如有盐结晶，摇动使结晶的盐溶解，然后用蒸馏水或去离子水作10倍稀释。稀释好的洗涤液可在4℃存放一周左右。


注意事项
1. 试剂盒使用前各试剂应平衡至室温，应将试剂盒各组份放置室温至少1小时以上。使用前应摇匀，使用后放回2-8℃。
2. 不同品种、不同批号试剂盒的试剂组分不得混用，使用试剂时应防止试剂污染。
3. 底物和终止液对皮肤和眼可能有刺激性，使用时应该注意防护。
4. TMB（显色液）不要暴露于强光和避免接触氧化剂。
5. 检测板拆封后应避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥剂放于自封袋中，并尽快置于2-8℃)。
6. 所有废弃物在丢弃之前应合理处理以免污染。
7. 严格遵守操作说明可以获得Z好的结果。操作过程中移液、定时和洗涤等的全部过程必须精确。
8. 抗原包被板为一次性用品，不得重复使用；


操作步骤
1. 每次试验均设置阳性对照1孔、阴性对照2孔，阴、阳性对照不用稀释，直接取100ul加入反应孔。
2. 将样品稀释液按90ul/孔加入到微孔反应板内，之后将待检样品血清按10ul/孔加入孔内并吹打混匀（移液器枪头请勿混用）；
3. 盖上封板膜（可按实际需要自行裁剪），置37℃温育60分钟。
4. 小心揭开封板膜，甩掉板孔中的溶液，使用工作浓度洗涤液每孔加250ul，后甩去孔内液体，以上步骤重复4-6次，在干净吸水纸上拍干。
5. 每孔加酶结合物100μl，盖上封板膜，置37℃温育60分钟。
6. 小心揭开封板膜，甩掉板孔中的溶液，洗涤4-6次, 方法同4。切记在干净吸水纸上拍干。
7. 每孔加显色液100µl，轻微震荡混匀、盖上封板膜37℃闭光显色15分钟。
8. 每孔加终止液50μl，使反应终止，10分钟内测定结果。


结果判定
用酶标仪于450nm（630nm作参比波长）读取吸光度OD值。
试验成立的条件是：
阴性对照（N）OD值>0.4；
计算方法：
样品OD值/阴性对照OD均值=S/N值。
阴阳性判断：
S/N值≥0.5则判断为阴性；
S/N值<0.5则判断为阳性。


有效期
贮存方法： 2 - 8ºC下贮存。
有效期： 12个月。