单核苷酸多态性是由于单个核苷酸的改变而导致的DNA核酸序列改变。如果这类突变发生在关键的基因位点,将导致个体表型发生变化。
检测手段:1. 测序法
在SNP位点两边设计引物,扩增含有SNP位点的PCR产物并进行测序。
2. 高分辨率溶解曲线(HRM)法
通过实时监测升温过程中双链DNA 荧光染料与PCR 扩增产物的结合情况判断SNP位点是否发生突变. 单核苷酸多态性(SNP)位点因不匹配会使双链DNA 在升温过程中先解开,荧光染料从局部解链的DNA 分子上释放,从荧光强度与时间曲线上就可以判断是否存在SNP,而且不同SNP 位点、杂合子与纯合子等都会影响熔解曲线的峰形,因此HRM 分析能够有效区分不同SNP 位点与不同基因型。
3. 扩增阻碍突变系统检测法
采用扩增阻碍突变系统(Amplification Refractory Mutation System , ARMS)检测等位基因突变位点。可实现在同一反应体系中检测多种等位基因的突变,依据产物片段大小,进行突变基因分型。单重检测体系一般使用琼脂糖凝胶电泳即可进行结果分析,多重检测体系一般需要使用高分辨率的毛细管电泳技术进行结果分析。