荧光素酶报告基因技术服务

    报告基因被广泛地应用于细胞生物学中的基因表达和细胞相关内容的研究。常用的报告基因主要有GUS基因、CAT基因、hGH基因、Cato2ase基因、绿色荧光蛋白基因及萤火虫荧光素酶基因等。在这些报告基因中萤火虫荧光素酶基因的表达产物－荧光素酶敏感性高，以荧光素(luciferin)为底物，测定方法快速且宜于掌握，线性好，并且荧光素酶产生的光产物是在已知的化学光敏反应中产生光量子的，荧光素酶是一蛋白质单体（61KD)，对酶活而言，不需要次级转录过程。因此，荧光素酶基因能够作为转录研究中的一类重要的报告基因。
荧光素酶报告系统是检测转录因子与目的基因启动子区DNA相互作用的一种检测方法。

服务内容：

1. 荧光素酶报告基因质粒制备。     
2. 细胞转染、活性检测。

服务流程：

1. 用生物信息学方法分析并预测启动子区可能的转录因子结合位点。
2. 设计引物用PCR法从基因组DNA中克隆所需的靶启动子片段，将此片段插入到荧光素酶报告基因质粒（pGL3-basic）中。
3. 筛选阳性克隆，测序。扩增克隆并提纯质粒备用。
4. 扩增转录因子质粒，提纯备用。同时准备相应的空载质粒对照，提纯备用。
5. 培养293（或其它目的细胞），并接种于24孔板中，生长10-24小时（80%汇合度）。
6. 将报告基因质粒与转录因子表达质粒共转染细胞。
7. 提取蛋白并用于荧光素酶检测。
8. 加入底物，测定荧光素酶的活性。
9. 计算相对荧光强度，并与空载对照比较。

客户需要提供的信息：

1. 目标基因序列或构建好的质粒。
2. 实验设计方案或参考文献。
3. 选择细胞系。

服务周期：
根据试剂盒订购周期，一般3-4周。