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猪圆环病毒二型实时荧光RT-PCR试剂盒

产品信息
  • 猪圆环病毒2型检测试剂盒说明书20151201版
    （Taqman探针一步法实时荧光RT-PCR）
    编号：KA005.01YB

    规格：48头份
    介绍：猪圆环病毒病（Porcine circovirus disease, PCDV）是与猪圆环病毒2型(Porcine circovirus disease type 2, PCV2)相关疾病或症状的统称，包括断乳仔猪多系统衰弱综合征（PMWS）、猪皮炎肾病综合症（PDNS）、猪呼吸疾病症状（PRDC）、母猪繁殖障碍（PRF）等。我国2008年修订的《一、二、三类动物疫病病种明录》将其列为二类动物疫病。
    用途：该试剂盒用于对PCV2进行检测，有助于对PCV2的实验室诊断、监测和流行病调查。
    原理：本试剂盒采用一步法实时荧光反转录聚合酶链式反应(One-Step Real Time RT-PCR) ，结合Taqman技术，对特异核酸进行定性或定量检测。
    试剂盒的组成
    试剂名称 数量
    PCV2反应液 550μL×1管
    PCV2引物探针 100μL×1管
    无核酸水 1000μL×1管
    PCV2阴性对照 1000μL×1管
    PCV2阳性对照 150μL×1管
    保存期及贮藏条件：本产品-20℃避光可保存12个月。
    样品收集，操作和储存
    1. Z好选择发病早期，无菌采样并立即送往实验室进行病毒检测。
    2. 样品短期可在4℃冷藏保存，较长时间保存应在--20℃或者-70℃，并且避免反复冻融。
    检测步骤
    1.核酸提取
    样品进行适当处理后，可采用本公司的核酸提取试剂盒，该试剂盒可用于对样本中病毒RNA的提取，请按照提取试剂盒说明书进行操作。也可选择其他合适的商品化产品。
    2.扩增试剂的准备
    将样品数+1份阴性对照+1份阳性对照设为N，计算试剂所需量，反应体系配制见下表
    试剂名称 N份用量（20μL 体系）
    PCV2反应液 10μL×（N+1）
    PCV2引物探针 1.8μL×（N+1）
    无核酸水 6.2μL×（N+1）
    将各试剂按照表中用量加入无菌离心管中，充分混匀，短暂离心后在PCR反应管中分别加入18μL混合液。
    3.加样
    将制备好的样本，阴性对照，阳性对照各取2μL分别加入对应反应管中，加完后盖紧PCR反应管盖，置于PCR仪上。
    4.荧光PCR扩增与信号收集
    循环数 温度（℃） 时间 数据收集位点
    1 95 2min -
    40 95 15s -
      60 1min 数据收集
    注：报告基团选FAM,淬灭基团选NONE。
    结果成立原则
    阳性对照：CT值＜30并有明显的扩增曲线。
    阴性对照：无CT值或者CT值>37，线性为直线或者轻微斜线，无明显扩增曲线。
    以上要求需同时满足，否则本次实验无效，需要重新进行。
    结果判定
    CT值 样本检测结果
    <30并有明显的扩增曲线 阳性，样本中检测出PCV2。
    30-37 可疑，需重复检测。若第二次检测CT值仍为30-37并有明显扩增曲线则判定为阳性，否则为阴性。
    >37并无扩增曲线 阴性，样本中未检测出PCV2。
    注意事项
    1.反应体系应在特定配液区或者超净工作台中配制，整个实验过程严格控制污染。
    2.PCR整个试验分配液区、模板提取区、扩增区。流程顺序为配液区→模板提取区→扩增区。严禁器材和试剂倒流。
    3.使用不含荧光物质的一次性手套，一次性离心管。
    4.反复冻融试剂将减低检测灵敏度，本试剂盒应在5次内用完.
    5．-20℃保存的各试剂管使用前应在室温下完全融化，液体融化后需彻底混匀，2000 rpm离心15 s ，使用后立即放回-20 ℃。
    6．在RNA提取过程中，避免RNA酶污染，尽量缩短操作时间。
    7．注意防止试剂盒组分受污染。不要使用超过有效期限的试剂，试剂盒之间的成分不要混用。
    8.PCR反应管避免气泡存在，管盖需盖紧。
    9.不同批次的试剂盒勿混用。
     
     
    温馨提示：不可用于临床ZL。
    • 信息声明：本产品供应信息由仪器网为您整合，供应商为（北京大有泰莱生物技术有限公司），内容包括 （猪圆环病毒二型实时荧光RT-PCR试剂盒）的品牌、型号、技术参数、详细介绍等；如果您想了解更多关于 （猪圆环病毒二型实时荧光RT-PCR试剂盒）的信息，请直接联系供应商，给供应商留言！
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