活体成像技术应用的生物发光肺癌细胞株NCI-H1299

活体成像技术应用的生物发光肺癌细胞株NCI-H1299

1.  细胞名称   NCI-H1299-DR

2.  组织  肺癌细胞

3.  母细胞来源  生化细胞所细胞库

4.  病毒来源 逆转录病毒(自制含荧光素酶和GFP的逆转录病毒)

5.  转染方法与标记过程的描述（逆病毒制备、感染与筛选）

1)  感染前消化NCI-H1299细胞并计数，将细胞铺于10cm培养皿中，确保感染前细胞达到20%-30%的汇合度。

2)  取4ml含逆转录病毒的培养基，加入40ul 10mg/ml的polybrene混合以0.45um滤膜过滤后加入细胞中。晃匀，37度孵育过夜。

3)  移去含有逆转录病毒的培养基，加入10ml完全培养基，37度正常培养12小时。

4)  重复2-3步，2-3个循环后用GFP的FACS筛选阳性细胞。

5)  阳性细胞系鉴定: 取1×104细胞，用裂解液裂解，加入荧光素酶作用底物，将转染质粒的细胞与阴性，阳性对照共同进行单报告基因检测。

6.  培养条件 ：置于37℃、5％CO2培养箱中，用含10％胎牛血清（FBS;    Hyclone）和1％双抗（100 U/ ml青霉素和100 μg/ ml链霉素，Invitrogen）的RPMI-1640（Gibco）培养基培养，培养三天（密度大概80%）按照1：4的比例传代。

7.  细胞传代所需时间：3天/代

8.  筛选标记维持压力和选择压力：无。

9.  体外实验数据：体外实验数据：1×104细胞裂解后，取1/4裂解液，Luciferase报告分析值在105以上。

10.      体内实验（进行皮下瘤或原位瘤的细胞接种条件）

裸鼠，10的5次方细胞，尾静脉注射，可成瘤。