DNA片段或PCR产物纯化试剂盒

 产品及特点：

       本试剂盒可用于从琼脂糖凝胶中回收DNA片段和PCR产物回收，并且对于一些酶反应液回收（酶切、连接、探针标记等）也同样适用。试剂盒采用可以GX、专一结合DNA的硅胶膜。可回收50 bp－40 Kb的DNA片段，回收效率可达90%。得到的DNA可直接用于连接、转化、酶切、测序、杂交等分子生物学实验。
1. GX，回收效率高达90%。
2. 快速，整个过程只需要十余分钟。
3. 纯度高，本试剂盒回收的DNA可直接用于酶切、连接、PCR等多种分子生物学实验。
4. 用途广，本试剂盒能回收单链、双链及环状DNA。
5. 价格便宜，比国内绝大多数同种产品的价格便宜。
6. 储存方便，试剂盒可以在室温放置数月，不影响其质量。
规格及成分
成份
50次包装（90506-50）
100次包装（90506-100）
通用溶胶液
25 mL
50 mL
离心吸附柱（CAT#:60911A）
50套
100套
通用洗柱液
50 mL
100 mL
通用洗脱液
5 mL
10 mL
使用手册
1份
1份
运输及保存
常温运输，4℃保存(长期)或室温保存(短期)，保存期限为12个月。
自备试剂
无
使用方法：
 一：胶回收
1. 切取含DNA片段的琼脂糖凝胶（100 mg左右，尽可能多地把多余的胶切除，否则会影响回收效率），放入1.5 mL离心管中，用移液枪头捣碎，按重量比为1：3到1：5的比例加入通用溶胶液(100 mg琼脂糖凝胶需要加入300 uL-500 uL通用溶胶液)。
a) 注：纯化PCR等反应体系中的DNA时可以直接在反应管中加3-5倍体积的通用溶胶液，混匀，然后跳过第2步、直接从第3步做起。
2. 65℃保温使胶完全溶化（一般需要5分钟），其间可以振荡数次以促进琼脂糖凝胶的溶化。
3. 将离心管中的溶液转移到高载量离心吸附柱中，套上液体收集管，静置3分钟，12,000 rpm离心1分钟并倒掉收集管中的液体。若一次加不完，可分两次加入并离心。
4. 加入500-600 uL通用洗柱液于离心柱中，室温静置2分钟，12,000 rpm离心1分钟，倒弃收集管中的废液。
5. 12,000 rpm离心半分钟以去除离心柱中的残留液体。
6. 将离心柱置于一新的干净的离心管（自备）中，加入25-50 uL 50-65℃预热的通用洗脱液，静置3分钟，12,000 rpm离心1分钟。
7. 离心管底部所得溶液即为纯化的DNA溶液，可立即用于后续实验或者放冰箱长期保存。
二：PCR片段回收
1. 在含DNA片段的PCR反应产物中，加入3倍体积的通用溶胶液。
2. 60℃水浴5分钟。
3. 将离心管中的溶液转移到离心吸附柱中，套上液体收集管，静置3分钟，12,000 rpm离心半分钟并倒掉收集管中的液体。
4. 加入700 uL通用洗柱液于离心柱中，室温静置2分钟，12,000 rpm离心半分钟，倒弃收集管中的废液。
5. 12,000 rpm离心半分钟以去除离心柱中的残留液体。
6. 将离心柱置于一新的干净的离心管（自备）中，加入30-50 uL 50-65℃预热的通用洗脱液，静置3分钟，12,000 rpm离心1分钟。
7. 离心管底部所得溶液即为纯化的DNA溶液，可立即用于后续实验或者放冰箱长期保存。
注意事项
1. 电泳回收DNA时，电泳缓冲液可以为TAE、TBE或者天泽基因的DNA/RNA两用快速电泳液SuperBuffer-2，回收效果为SuperBuffer-2Z好，TAE次之，TBEZ差。详细见天泽基因 SuperBuffer-2产品介绍。
2. 专用上柱液含有容易挥发物质，请密闭保存。
3. 液体转移到离心柱后，可以延长静置时间使DNA与膜充分结合，提高回收效率。
4. 加专用上柱液的作用是洗盐。
5. 洗脱DNA前的空甩很重要，以去除膜上残留酒精，否则残留酒精会影响后续DNA反应。
6. 加TE洗脱DNA时，Z好把离心柱放入50-65℃水浴加热，但要注意把离心管密闭好；增大TE使用量有利于回收，但要注意实际上样量与回收体积的关系，以便于计算回收率。TE可以用水替代，但pH不能低于7.5。
疑难解答
Q：为何用硅胶膜吸附柱法回收TBE胶中的DNA效果不好？
A：因为TBE中的硼酸会跟硅胶表面的OH基团反应，而这些OH又是吸附DNA所必需的。
背景资料
DNA-Silica结合原理及影响因素（综述,见天泽基因目录或网站）
关联产品
一管式胶回收试剂(CAT#:60706)，5分钟超快核酸电泳液(CAT#:51210)