北京代做（原位杂交实验）价格要求北京冬歌生物支持提供

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　　荧光原位杂交技术是一种重要的非放射性原位杂交技术。它的基本原理是:如果被检测的染色体或DNA纤维切片上的靶DNA与所用的核酸探针是同源互补的，二者经变性-退火-复性，即可形成靶DNA与核酸探针的杂交体。将核酸探针的某一种核苷酸标记上报告分子如生物素、，可利用该报告分子与荧光素标记的特异亲和素之间的免疫化学反应，经荧光检测体系在镜下对待测DNA进行定性、定量或相对定位分析。

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一、基本要求

组织取材：组织取材应尽可能新鲜。由于组织RNA降解较快，所以新鲜组织和培养细胞Z好在30min内固定。

固定目的是：

（1）保持细胞结构；

（2）限度地保持细胞内DNA或RNA的水平；

（3）使探针易于进入细胞或组织。

Z常用的固定剂是多聚甲醛，与其它醛类固定剂（如戊二醛）不同，多聚甲醛不会与蛋白质产生广泛的交叉连接，因而不会影响探针穿透入细胞或组织。

增强组织的通透性和核酸探针的穿透性：

（1）稀酸处理和酸酐处理：为防止探针与组织中碱性蛋白之间的静电结合，以降低背景，杂交前标本可用0.25%乙酸酐处理10min，经乙酸酐处理后，组织蛋白中的碱性基团通过乙酰化而被阻断。组织和细胞标本亦可用0.2M HCl处理10min，稀酸能使碱性蛋白变性，结合蛋白酶消化，容易将碱性蛋白移除。

（2）去污剂处理：去污剂处理的目的是增加组织的通透性，利于杂交探针进入组织细胞，Z常应用的去污剂是Triton X-100。注意：过度的去污剂处理不仅影响组织的形态结构，而且还会引起靶核酸的丢失。

（3） 蛋白酶处理：蛋白酶消化能使经固定后被遮蔽的靶核酸暴露，以增加探针对靶核酸的可及性。常用的蛋白酶有蛋白酶K（proteinase K），还有链霉蛋白酶（pronase）和胃蛋白酶（pepsin）等。

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操作步骤

（一）取材、冰冻切片

（二）探针制备与检测（定量

（三）原位杂交反应（以DIG-cDNA探针为例）

四、注意事项：

1.  作为DNA-RNA的杂交，需防RNase的污染。

2.  cDNA探针在杂交时必须变性解链。具体方法是：将探针置100℃加热5 min，冰浴骤冷。

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