小鼠抗 His 标签单抗1000μL

小鼠抗 His 标签单抗1000μL二：细胞裂解
5. 如果用本产品 A 型，用 1 mL 冰浴的新鲜配制的细胞裂解液（1 mL 1×PBS 缓冲液+50 uL 溶液 A+ 25 uL 10 mg/mL 的 PMSF 溶液）重悬细菌沉淀，冰上超声裂解菌体直到在显微镜下看见绝大多数细胞破裂。超声参数需根据仪器型号自行摸索，一般选 1K-10K 频率处理 15 次，每次20 秒，间隔 1 分钟（必需放置在冰上）。裂解物不能粘稠，否则会堵塞
层析柱。
6. 如果用本产品 B 型，在 1 mL 冰浴的新鲜配制的细胞裂解液（在 20 mL1×PBS 缓冲液中加入所有 30 mg 溶菌酶干粉，溶解后分装成 1 mL/管，取一管使用，剩余的-20℃放置）中加入 25 uL 10 mg/mL 的 PMSF 溶液和 1 uL Benzonase，用此混合液重悬细菌沉淀后冰上放置 30 分钟，得到细菌裂解物。
7. 将超声或酶法细胞裂解物在 13000 g 4℃离心 10 分钟去除未裂解细胞和裂解细胞碎片以防堵柱，所得上清即含可溶性 GST 标记蛋白。
三：层析柱的制备和 GST 蛋白纯化
8. 摇晃将谷胱甘肽-Agarose 介质充分混匀后，取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中（介质用量需要根据 GST 蛋白产量决定，100 mL 菌液一般使用 200 uL 介质即可）。下列步骤各溶液的用量均针对 200 uL 介质而定，如果介质用量不同，各溶液用量需相应调整。
9. 用 5 mL 预冷的 1×PBS 缓冲液洗柱。
10.将第 7 步得到的上清液（含可溶性 GST 标记蛋白）上柱，让重力使上柱液自然流出，收集并保存穿透液用于 SDS-PAGE 电泳。GST 和谷胱甘肽之间的结合很缓慢，所以流速一定不能快，否则结合不充分。流速一般在 0.2-1 mL/分钟即可。如要提高 GST 标记蛋白与介质的结合效率，可用本试剂盒提供的红盖将层析柱下的漏液口堵上，让细菌裂解液和介质在4℃结合 30 分钟或过夜。也可以将穿透液反复上柱。
11.用 0.5-2 mL 1×PBS 缓冲液洗柱，收集并保存穿透液（含杂蛋白）。
12.用 0.2-1 mL GST 洗脱液洗柱，收集并保存穿透液（含 GST 标记蛋白）。由于可能含蛋白酶污染，所以穿透液不能在 4℃放置，需立即用于后续处理（如浓度测定或 SDS-PAGE 电泳）或-80℃长期放置。
13.对收集的 2 种穿透液和洗脱液进行蛋白定量或 SDS-PAGE 分析。注意：如果不预先脱盐，则只能用 Bradford 法或 OD 检测法（1 OD280 约等于 0.5 mg/mL 蛋白）测定穿透液和洗脱液的蛋白浓度。由于 GST 的分子量为 26 KD，所以在 SDS-PAGE 胶上，GST 标记蛋白将比天然蛋白大 26 KD。
原理及特点:
重组蛋白 N 端的 GST 谷胱甘肽 S 转移酶（Glutathione S Transferase）能提高重组蛋白的水溶性，所以常用于蛋白质重组表达。GST-谷胱甘肽亲和层析是利用 GST 标记的蛋白能与谷胱甘肽层析介质结合，并能被还原型谷胱甘肽洗脱的特点而建立，是目前分离纯化 GST 标记蛋白质的重要方法。本产品就是专门用于上述目的，具有下列
小鼠抗 His 标签单抗1000μL特点：
1. 一站式套装，含所需的谷胱甘肽介质、溶液和层析柱，用户只需要提供表达 GST 标记蛋白的细菌（酵母、杆状病毒、培养细胞）即可，非常方便。
2. 专一性强，一次过柱即可获得纯度高达 95%的 GST-标记蛋白。
3. 只能在非变性条件下使用，只可用于纯化没形成包涵体的 GST 标记蛋白。
4. 每次可以处理 20 mL 的表达菌液，适合初步筛选和鉴定。
5. 提供 4 mL 浓度为 50%的谷胱甘肽-Agarose 介质，可吸附 5-10 mgGST 标记蛋白质。
6. 本介质可以反复使用多次。
一:重组蛋白的表达和细菌收集
1. 37℃振荡培养 20 mL 含表达质粒的细菌到 OD600=0.6-0.8。
2. 加 IPTG 到终浓度为 0.1 mM，30℃振荡培养 3 小时或 22℃振荡培养 8小时（或过夜）。
3. 4℃ 5000 g 离心 10 分钟收集 20 mL 表达菌液，弃上清。
4. 用 1×PBS 缓冲液重悬细菌沉淀，4℃ 5000 g 离心 10 分钟，弃上清。沉淀可直接用于裂解或放-80℃保存。

XLD 培养基      250选择性培养基，主要用于分离志贺氏菌属，亦可用于分离沙门氏菌(FDA标准)

WS 琼脂    250用于沙门氏菌的选择性分离（GB标准）

葡萄糖铵培养基　 250用于志贺氏菌的葡萄糖铵试验（GB标准）

葡萄糖半固体培养基   250用于志贺氏菌的复合生化试验（GB标准）

动力-吲哚-尿素培养基基础250用于细菌的复合生化试验

醋酸铅培养基  250用于硫化氢试验

SIM培养基  250用于硫化氢、动力、吲哚试验

乳糖肉汤   250用于食品中沙门氏菌检验前增菌

EF-18 琼脂250用于滤膜法检测食品中沙门氏菌(SN/T1059.1)

新生霉素1.5mg/支*5使用前，每支加入100mlHB4153中

RVS 肉汤250用于食品中沙门氏菌检验选择性增菌(ISO标准)

MKTTn 肉汤250用于食品中沙门氏菌检验选择性增菌(ISO标准)

赖氨酸铁琼脂(LIA)250用于食品中沙门氏菌生化试验(FDA标准)

改良MSRV培养基250用于沙门氏的分离培养(MERCK方法)

SCCRAM肉汤250滤膜法食品中沙门氏菌前增菌(SN/T1059.1)

BPL琼脂250用于食品中沙门氏菌选择性分离培养(Merck方法)

改良BPLS琼脂250用于各种标本中沙门氏菌选择性分离培养(ISO标准)

MIO培养基250用于动力、吲哚和鸟氨酸试验(FDA方法)

XLT4琼脂250用于食品中致病菌，特别是沙门氏菌分离培养(Merck方法)

Ｄ/E中和肉汤250用于卫生环境中微生物的分离培养(ACUMEDIA方法)

Ｄ/E中和琼脂250用于卫生环境中微生物的分离培养(ACUMEDIA方法)

小鼠抗 His 标签单抗1000μLM –肉汤250用于干燥食品和种子中沙门氏菌增菌培养(MERCK方法)

煌绿琼脂250用于沙门氏菌的分离培养(Acumedia方法)

煌绿黄胺嘧啶琼脂250用于沙门氏菌的分离培养(Acumedia方法)

BGS 琼脂250用于沙门氏菌的分离培养(USDA-FSIS方法)

碱性蛋白胨水    250用于霍乱弧菌选择性增菌培养(SN标准)

TCBS琼脂    250用于致病性弧菌的选择性分离（GB、SN标准）

氯化钠多粘菌素B肉汤基础(SCPB)    250用于副溶血性弧菌选择性增菌培养，用前应无菌加入多粘菌素B（SN标准）

多粘菌素B   2.5万单位/支*5添加于100mlHB4131中

精氨酸双水解酶试验用培养基(AD)5生化培养基，用于弧菌的精氨酸试验

四号琼脂基础      250用于霍乱弧菌选择性分离培养，灭菌冷至50℃加入亚碲酸钾，倒平板

我妻氏培养基基础     250用于神奈川现象试验（SN标准）

60%/L氯化钠蛋白胨肉汤    250用于副溶血性弧菌的前增菌培养

氯化钠三糖铁     250用于副溶血性弧菌的生化反应筛选（SN标准）

胰胨大豆琼脂斜面（TSA）   250培养副溶血性弧菌，做细胞色素氧化酶实验（SN标准）

42℃生长培养基       250用于副溶血性弧菌42℃生长试验

O/F培养基(HLGB)    250用于鉴别弧菌葡萄糖代谢类型（发酵型或氧化型）（SN标准）

氯化钠结晶紫增菌液    250用于副溶血性弧菌的选择性增菌培养（GB标准）

氯化钠蔗糖琼脂    250用于副溶血性弧菌的选择性分离培养（GB标准）

嗜盐菌选择性琼脂  250用于副溶血性弧菌的选择性分离培养（GB标准）

氯化钠血琼脂基础   250用于副溶血性弧菌的溶血试验

霍乱双糖铁琼脂(KIA)250用于霍乱弧菌的生化试验（SN标准）

T1N1 琼脂       250用于霍乱弧菌的培养（SN标准）

T1N0 肉汤        250用于霍乱弧菌的生长试验（SN标准）

T1N3 肉汤        250用于霍乱弧菌的生长试验（SN标准）

精氨酸葡萄糖斜面琼脂    100用于霍乱弧菌的复合生化试验（SN标准）

mCPC 培养基250用于弧菌分离培养(FDA标准)

mCPC培养基添加剂1ml*5每瓶添加于100ml mCPC培养基中

副溶血性弧菌琼脂250用于副溶血性弧菌的选择性分离培养

副溶血性弧菌增菌液250用于副溶血性弧菌的增菌培养

 酵母 霉菌 青霉 曲霉

察氏琼脂    250用于青霉、曲霉鉴定及保存菌种用

产毒培养基    250用于青霉、曲霉的产毒培养

马铃薯葡萄糖琼脂 (PDA)  250用于霉菌、酵母菌计数(GB标准)

高盐察氏琼脂  250用于霉菌和酵母菌的计数(GB标准)

玉米粉琼脂  250用于真菌培养

孟加拉红培养基   250用于食品中霉菌及酵母菌总数测定

酵母粉葡萄糖氯霉素琼脂250用于食品中霉菌及酵母菌总数测定