GRE-Luc荧光素酶报告基因质粒厂家现货

名称：GRE-Luc荧光素酶报告基因质粒厂家现货
编号：SY0081
规格：1μg
品Pai：百奥莱博
英文名：GRE luciferase reporter plasmid
GRE报告基因（报告基因质粒）（GRE luciferase reporter plasimd）是用于检测glucocorticoidreceptor转录活性水平为目的的报告基因。GR（glucocorticoidreceptor)调控的糖皮质类固醇是强有力的KY介质，并对心血管、新陈代谢、免疫和体内平衡功能进行调节或维持。

GRE报告基因主要应用于糖皮质激素介导的信号途径(glucocorticoid-mediated signaling pathway)的激活水平研究、药物研究以及基因过表达和RNAi表型分析等。

pGMGRE-Lu是我公司改造后的哺乳动物真核表达载体，在其多克隆位点插入了多个GR结合位点，可以高灵敏度地检测GR的激活水平。同时，对载体中预测出的其它转录因子以外的结合位点进行了适当的突变，增加了质粒的转录因子结合特异性。由于质粒体积减小，使得GRE报告基因质粒更易于转染。

质粒图谱



注意事项
本质粒未经我公司允许不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人实验室以外的任何人或单位。
为了您的健康，实验操作时请穿实验服和带一次性手套。

使用说明
pGMGRE-Lu可以采用常规转染方法转染哺乳动物细胞。用荧光素酶检测试剂盒或双荧光素酶检测试剂盒进行检测。

储存条件：-20℃。

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·pUM19-T Vector TA克隆载体
编号：SY0022
规格：5μg
pUM19-T载体是一种GX克隆PCR产物（TA Cloning）的专用载体。它是在线性化pUC19载体的基础上，在两侧的3’端添加碱基T而制成。特殊的纯化方式使得超过99%的pUM19载体两端都具有3’-T突出端，因此极大的降低了载体自连率。由于大部分耐热聚合酶反应时都会在PCR 产物的3’端添加一个A，可与pUM19载体3’端的T互补连接，因此可大大提高PCR 产物的连接和克隆效率。pUM19载体多克隆位点位于β-lactamase基因内，可以通过蓝白斑快速筛选含有插入片断的重组子。连接使用的PCR 片段3’端应带有A 末端；Pfu DNA Polymerase等高保真聚合酶的扩增产物不带A，应先在其末端加A后再进行TA克隆。本品随载体提供对照片段(500bp)用于阳性对照反应。

1.将载体置于冰上融化。建议次使用时将载体分装成小份保存，每次取一支使用。

2.按下表配置连接反应体系
ddH2O——To 10 μl
10×Ligase Buffer——1 μl
pUM19-T Vector (50 ng/μl)——1μl (约0.025 pmol)
插入片段*——0.075 pmol～0.25 pmol
T4 DNA Ligase (400 U/μl)——1 μl
注：插入片段与载体的摩尔比应在3:1～10:1之间。请根据琼脂糖凝胶电泳或紫外分光光度计检测确定插入片段的浓度，并根据其大小计算摩尔量。1 pmol 1 kb双链DNA的质量约为660 ng。

3.对照反应体系（可选）：
ddH2O——6 μl
10×Ligase Buffer——1 μl
pUM19-T Vector (50 ng/μl)——1 μl (约0.025 pmol)
500 bp control insert(50 ng/μl)——1 μl (约0.15 pmol)
T4 DNA Ligase (400 U/μl)——1 μl

4.轻轻吹打混匀反应体系，室温22-26℃孵育1-2小时，或16℃过夜。
5.转化：
1) 将连接产物加入到100 μl感受态细胞中(连接产物的体积不要超过感受态细胞体积的1/6)，轻轻弹匀，冰上孵育30分钟。
2) 将离心管置于42℃水浴，不要晃动，准确热激90秒后，立刻置于冰水浴中，不要晃动，静置2-3分钟。
3) 向离心管中加入900 μl LB或SOC培养基，150 rpm, 37℃振荡培养45分钟，使菌体复苏，抗性基因表达。
4) 2500 g离心5分钟，去掉900 μl上清。用剩余培养基将菌体重悬混匀，用无菌涂布棒在含有正确抗性的平板上轻轻涂匀，室温正置10分钟。待菌液被平板吸收后，37℃倒置培养过夜。
注：如果使用超级感受态细胞（转化效率>108 cfu/μg），可以直接吸取100-200 μl孵育后的菌液涂板。剩余菌液可在4℃保存，一周之内都可重新涂板。

储存条件：-20℃。

注意事项
1) 尽量避免反复冻融，可将载体和对照片段分装成小份后保存。
2) 为了您的健康，实验操作时请穿实验服和带一次性手套。


GRE-Luc荧光素酶报告基因质粒厂家现货