名称:重组烟草蚀纹病毒蛋白酶促销
产地:国产|进口
品Pai:百奥莱博
编号:SY0385
规格:1000U
重组型TEV蛋白酶(rTEV)是经过基因工程改造和纯化后的重组蛋白酶,不仅保持天然TEV酶的功能活性,且在广谱的温度范围内表现出更好的稳定性和特异性。rTEV是一种用来切除融合蛋白上亲和标签的常用工具酶,具有很强的位点特异性,严格识别七氨基酸序列EXXYXQ↓(G/S),切割位点在谷氨酰胺和甘氨酸/丝氨酸之间。普遍应用的七氨基酸序列为:Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln↓-Gly。rTEV在pH 7.0,30℃时可达到活性,但在pH 6.0-8.5和温度4-30℃的广泛范围内皆有活性(见表1),使得反应条件的选择可根据目的蛋白的情况而灵活变动。另外rTEV切割后也能利用其N端的 6×His标签,通过Ni-NTA树脂去除,以达到纯化目的蛋白的目的。
表1. 不同温度下rTEV酶切活性
| 应时间 | 不同温度下剪切活性(%) |
| 4℃ | 16℃ | 21℃ | 30℃ |
| 1 h | 34 | 58 | 56 | 70 |
| 2 h | 58 | 80 | 78 | 90 |
| 3 h | 71 | 99 | 99 | 99 |
| 3.5h | 84 | 99 | 99 | 99 |
影响天然TEV酶活性的常见因素:1)PMSF和AEBSF(1 mM),TLCK(1 mM),Bestatin(1 mg/ml)、Pestatin A(1 mM),EDTA(1 mM)以及E-64(3 mg/ml),以上这些蛋白酶YZ剂对rTEV的活性没有影响;2)Zn离子(>5 mM)对rTEV活性有YZ;3)与半胱氨酸反应的试剂也是rTEV的潜在YZ剂。
来源:大肠杆菌
外观:无色透明液体
比活力:5 U/μl
活性定义:在1×rTEV Buffer(50 mM Tris,pH8.0,0.5 mM EDTA,1mM DTT)中,30℃反应1h,剪切>85%的3 μg底物所需要的酶量定义为一个活性单位。
纯化(Purification ):Ni亲和纯化
纯度:≥95%(by SDS-PAGE)
产品组份:
rTEV Protease(5 U/μl)—————200 μl
rTEV Buffer 1(20×)——————2 ml
rTEV Buffer 2(1000×)—————50μl
储存条件:-20℃,有效期一年。
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·链cDNA Synthesis Super Mix for RT-qPCR
编号:SY0291
英文名称:First Strand cDNA Synthesis Super Mix for RT-qPCR
规格:200T
本试剂盒基于Reverse Transcriptase,该酶热稳定性提高,在50℃的半衰期超过240min,且可长时间耐受高达55℃的反应温度,适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录,能稳定可靠地合成cDNA。且Reverse Transcriptase的独特设计,进一步增强了模板亲和力和行进性,使得全长cDNA的合成能力有了大幅度提升,可获得长达20 kb的cDNA,并且对于常见的逆转录YZ物具有更高的耐受度,非常适合于植物组织RNA的逆转录反应。
本试剂盒包含由总RNA或mRNA合成高质量条链cDNA所需的所有成分,并提供两种cDNA合成引物:Random hexamers和oligo(dT)18。合成的单链cDNA产物可直接用来进行后续PCR、qPCR以及PCR克隆。其中,5×RT Mix包含优化的缓冲体系和dNTP; Enzyme Mix包含Reverse Transcriptase和RNase inhibitor。可根据需要,选择Oligo (dT)18、Random hexamers或基因特异引物作为逆转录引物。
产品组份:
RNase free ddH2O————1 ml
5×RT Mix————200 μl
Enzyme Mix*————50 μl
Oligo dT18 (0.5 μg/μl)————50 μl
Random hexamers (N6)————50 μl
* 包含RNase inhibitor,用于抵抗环境和体系中可能存在的痕量的RNase。
质量控制
所有组分经检测均无核酸外切酶、核酸内切酶、RNase残留。
功能检测1:以500 ng mouse total RNA为模板,Oligo dT18为引物,50℃反应45分钟。取1/10 cDNA产物进行PCR扩增nebulin基因。琼脂糖凝胶电泳,EB染色,可见有单一的20.0 kb条带。
功能检测2:以100 pg Hela cell total RNA为模板,Oligo dT18为引物,50℃反应30分钟。取1/10 cDNA产物进行PCR扩增β-actin基因。琼脂糖凝胶电泳,EB染色,可见有单一的550 bp条带。
功能检测3:以500 ng Hela cell total RNA为模板,Oligo dT18为引物,55℃反应45分钟。取1/10 cDNA产物进行PCR扩增Polε基因。琼脂糖凝胶电泳,EB染色,可见有单一的4.8 kb (GC-rich)条带。
功能检测4:以1 pg-1 µg HeLa cell total RNA为模板,以Oligo dT18和Random hexamers为引物,测试qRT-PCR性能。
储存条件:-20℃,有效期12个月。
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