1. 问：ELISA方法的准确性一般会用LC、LC-MS或者LC-MSMS做验证，因为我的方法涉及到小分子药物的衍生测定，所以液相的方法达不到回收率，请问有没有其他的方法可以用来验证ELISA方法的准确性呢？有没有这种可能是我的药物衍生体系本身这种方法与液相的流动相冲突，不适合用液相去测定？
答：通常用ELISA方法检验出来的阳性样品，需要用LC、LC-MS、GC-MS或者LC-MSMS做确证，因为ELISA方法的存在约5%左右的假阳性。究竟用上述的哪一种方法去确证其准确性，是要根据被测组分的理化性质决定的，例如组分在300度也不能够汽化，肯定不能用GC-MS；组分结构中有共轭，存在 n→π跃迁,π→π跃迁，一般会用HPLC紫外检测器；若组分具有荧光或者通过衍生化反应可以定量产生具有荧光的物质，则会用HPLC荧光检测器。以此类推，究竟用什么方法确证取决于被测组分的理化性质，而不是凭空想象。
2. 问：做了很多次ELISA实验，每次都能够得到线性比较好的标准曲线，但是同样浓度的标准品每次的OD值都不一致，猜可能是酶标板的问题，有什么方法可以快速验证酶标板的可靠性吗？
答：ELISA本身灵敏性很高，每次做出来的值不一样很正常，特别是od值比较大的时候更是差别很大，但是只要不要偏差太大就好，一般偏差要求10%内吧，好的数据是3%内。
首先要稳定所有的条件，不同的条件下做的板子读值不一样很正常。在同样条件下同批次的板子，如果测定不一样，就是包被问题或者保护剂的问题，但这两个都是各个试剂盒的机密，Z好看看文献里别人怎么做的。
其次每次实验的标曲上同一浓度样品的OD值不一样是很正常的，这与抗原抗体反应体系、作用时间、显色时间等等一系列的因素有关。鉴定该ELISA体系是否可靠，Z关键的指标是加标回收率和稀释线性，如果你怀疑的话可以做一下。
一般来说，国外知名厂商的ELISA试剂盒是没有问题的。同时你还要看一下说明书中ELISA试剂盒的灵敏度，如果样品浓度低于该检测下限，则无法检测到，这是很正常的现象，并不是非要每个样品都要测出值才可以。
使用广泛 好评不断
劲马客户遍及全国各地，包括：中科院、北京生命科学研究院、北京大学、清华大学、复旦大学、华西医科大学、北京师范大学、华中科技大学等高校及研究机构。
华中科技大学同济医学院-陈老师
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－-
评语：贵公司产品便捷、有效，板内重复性好，所提供试剂也足够多次实验, 对实验很有帮助！
发表文章：Ethyl pyruvate attenuates murine allergic rhinitis partly by decreasing high mobility group box 1 release, Experimental Biology ａnd Medicine, 2015.
重庆大学-刘老师
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
评语：劲马ELISA试剂盒重复性好，板间差异小。而且设定了的检测范围，检测灵敏度高，生产团队专业，质量有保障！
文章：Enzyme responsive mesoporous silica nanoparticles for targeted tumor therapy in vitro ａnd in vivo, Nanoscale, 2015.
四川大学华西医院-刘老师
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－-
评语：我对劲马的ELISA试剂盒总体比较满意，操作步骤简单、产品灵敏性和重复性较好，性价比较高。希望贵公司能推出更多的品种试剂盒。
文章：The effect of chronic stress onanti-angiogenesis of sunitinib in colorectalcancer models, Psychoneuroendocrinology, 2015.
华南理工大学-廖老师
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
评语：劲马公司生产小鼠肿瘤坏死因子TNF-α和白介素IL-6的ELISA检测试剂盒灵敏度高，重复性好，性价比高，送货快，技术客服态度不错， 很有耐心！支持国产。
文章：Structure Characterization of a Novel Polysaccharide from Dictyophora indusiata ａnd Its Macrophage Immunomodulatory Activities, Journal of agricultural ａnd food chemistry, 2014.
深圳大学生命科学学院-续老师
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
评语：劲马的TNF-alpha、IL-1beta、IL-6、IL-12的ELISA试剂盒我们都用过，灵敏度高，重复性好，价格便宜。技术客服和售后人员的态度都不错，有耐心！为我们的科研提供保障。
文章：Morphological ａnd Proteomic Analyses Reveal that Unsaturated Guluronate Oligosaccharide Modulates Multiple Functional Pathways in Murine Macrophage RAW264. 7 Cells, Marine drugs, 2015.
代理品Pai
我司ELISA试剂盒代理品Pai推荐
美国R&DELISA试剂盒公司简介
R&D Systems offers a wide variety of complete ELISA kits that have been exhaustively tested for superior
quality ａnd reproducibility. They are available in a range of formats including colorimetric,
fluorescence, ａnd chemiluminescence-based kits for measuring intracellular ａnd extracellular proteins.
Tsz Biosciences公司简介
Your source of quality proteins, peptides, ELISA kits, antibodies, methods ａnd more
Tsz Biosciences provides biological reagents ａnd services to aid in molecular detection, assay
development & protein expression ａnd purification. We provide over more than 10,000 different types of
antibodies ａnd have one of the richest supplies of ELISA kits. Along with the manufacturing of CD
antigens, cytokines, growth factors, enzymes, Tsz Biosciences can provide you Protein Expression and
Purification service based on your requirements. Tsz Biosciences is dedicated to accelerating your
research ａnd development.
满足标准
试剂的准备之显色
显色是 ELISA 中的一步温育反应，此时酶催化无色的底物生成有色的产物。反应的温度和时间仍是影响显色的因素。在一定时间内，阴性孔可保持无色，而阳性孔则随时间的延长而呈色加强。适当提高温度有助于加速显色进行。在定量测定中，加入底物后的反应温度和时间应按规定力求准确。定性测定的显色可在室温进行，时间一般不需要严格控制，有时可根据阳性对照孔和阴性对照孔的显色情况适当缩短或延长反应时间，及时判断。
OPD 底物显色一般在室外温或37℃反应20-30 分钟后即不再加深，再延长反应时间，可使本底值ZG。
OPD 底物液受光照会自行变色，显色反应应避光进行，显色反应结束时加入终止液终止反应。OPD 产物用硫酸终止后，显色由橙黄色转向棕黄色。
TMB 受光照的影响不大，可在室温中置于操作台上，边反应观察结果。但为保证实验结果的稳定性，宜在规定的适当时间阅读结果。T MB 经HRP 作用后，约40 分钟显色达顶峰，随即逐渐减弱，至2 小时后即可完全消退至无色。TMB 的终止液有多种，叠氮钠和十二烷基硫酸钠(SDS)等酶YZ剂均可使反应终止。这类终止剂尚能使蓝色维持较长时间(12-24 小时)不褪，是目视判断的良好终止剂。此外，各类酸性终止液则会使蓝色转变成黄色，此时可用特定的波长(450nm)测读吸光值。
