人细胞周期素D2(Cyclin-D2)ELISA ,产品价格
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人细胞周期素D2(Cyclin-D2)ELISA 试验时酶活性受到影响的几种原因:
酶活性受到影响时,可能的因素有许多,简单的说可分为内因和外因。
内因包括甲基化底物、位点偏爱性、底物的构象。构象的影响主要指切割线性 DNA 和超螺旋DNA 时的活性,如与切割DNA相比,EcoRⅠ、PstⅠ、SalⅠ需要至少2.5-10 倍的酶来切割pBR322 的超螺旋 DNA 。PaeRTⅠ与XhoⅠ切割相同的序列(C↓TCGAG),但如果5’端为CT则PaeRTⅠ不能切割。
外因是可预见和控制的,如反应条件、底物的纯度(是否是否有盐酚的污染、有杂质)、什么时间段加酶、操作是否合理、反应体积的选择以及反应时间的控制等等。
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人细胞周期素D2(Cyclin-D2)ELISA 试验时控制酶切反应的四个条件:
1.反应时间:反应时间通常为1小时或更长,减少酶的用量可使许多酶延长反应时间;
2.反应温度:反应温度大多数为37℃ ,少数25-30℃ ,一部分为50-65℃;
3.缓冲液:缓冲液的选择非常重要。常规缓冲液是能提供稳定pH值的缓冲剂。例如:Mg++ 、DTT(二硫苏糖醇)以及BSA(小牛血请白蛋白)。
4.终止酶切的方法:加热是常用的方法,对于反应温度为37℃ 的酶,在65℃ 或80℃ 处理20 分钟可使酶活性大部分丧失。
B37-4x1.5ml100mM Tris-HCl (pH 8.8,25℃),500mM KCl,0.8%(v/v)Nonidet P40,MgCl2在每种缓冲液的浓度不同(12.5-30mM)。 缓冲液/4x1.5ml
B36-0.25mlSupplied in: 10mM Tris-HCl (pH 7.4,25℃),100mM KCl,1mM EDTA和50%(v/v)甘油。 缓冲液/0.25ml
RT4732-1mlDNA-EZ Reagents C DNA-Be-Down 微量DNA沉淀剂/1ml
DT4771-25mlDNA-EZ Reagents F DNA-Be-Locked A DNA组织样品常温保存液/25ml
DT72021-25mlDNA-EZ Reagents G DNA-Be-Locked B for blood samples 血液DNA常温保存液/25ml
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