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N端BFP标签融合蛋白质粒(蓝色荧光蛋白)厂家

产品信息
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名称:N端BFP标签融合蛋白质粒(蓝色荧光蛋白)厂家
英文名:N-BFP plasmid(with CMV promoter)
编号:YT473
规格:1μg
品Pai:百奥莱博
产地:国产|进口
本质粒是哺乳动物细胞表达质粒,用于表达N端含BFP(Blue Fluorescent Protein, 蓝色荧光蛋白)标签的融合蛋白。该质粒含有CMV启动子,可以GX启动目的蛋白在细胞中的表达。在多克隆位点的前面有一个BFP的完整编码序列,因此在多克隆位点根据阅读框插入目的基因就可以表达N端含有BFP标签的融合蛋白。利用BFP的荧光特性可以比较容易地观察融合蛋白的表达水平和细胞内定位,也可以利用BFP抗体来检测或免疫沉淀融合蛋白。BFP与GFP高度相似,可尝SYGFP抗体检测BFP。该质粒为卡那霉素抗性。转染细胞后,可以使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。

本质粒质粒的主要信息如下:

Feature Nucleotide Position
CMV promoter 1-602
T3 promoter and T3 primer binding site 620-639
BFP 677-1393
Multiple cloning site 1394-1483
T7 promoter and T7 primer binding site 1503-1524
SV40 polyA signal 1536-1919
f1 origin of ss-DNA replication 2057-2363
bla promoter 2388-2512
SV40 promoter 2532-2870
Neomycin/kanamycin resistance ORF 205-3696
HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal 3697-4155
pUC origin 4284-4951


本质粒的图谱如下:


使用说明:
1. 首次使用时请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2. 本质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因,构建的质粒可以用常规方法转染细胞。

储存条件:-20℃。
N端BFP标签融合蛋白质粒(蓝色荧光蛋白)厂家
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·磷酸化Histone H3(Ser10位点)抗体
编号:YT802
英文名称:anti-Phospho-Histone H3(Ser10) antibody
规格:>20次
本抗体是用经过适当修饰的人工合成的含磷酸化Ser10的人Histone H3一段多肽(aa7-20)作为抗原制备而成的小鼠单克隆抗体。本抗体如果用于常规的Western检测,至少可以检测20次。

本Phospho-Histone H3(Ser10)抗体识别Ser10被磷酸化的Histone H3,不识别其它位点磷酸化的组蛋白。

组蛋白histone H2A,H2B,H3和H4各两个分子组成的八聚体和与该八聚体相结合的DNA构成了染色质的基本结构核小体(necliosome)。组蛋白的存在确保了基因组DNA可以被相对致密而有序地堆放在细胞核中。人一个细胞的基因组DNA完全拉成线性的总长度约为1.4米,但染色质的总长度仅为9厘米,而有丝分裂时染色体的总长度仅为0.12毫米。除了核心组蛋白(core histone)histone H2A,H2B,H3和H4外,还有一类linker histone H1和H5。Histone H1可以结合核小体和DNA在核小体中进出的位点,从而使DNA的位置被锁定,有利于在核小体基础上形成更高级的空间结构(参考下图)。组蛋白结合区域的DNA长度为147bp,核小体间的DNA长度大约为50bp。染色质空间结构的松散还是致密很大程度上决定了该区域基因转录水平的高低(参考下图)。



组蛋白是真核生物中呈强碱性的蛋白。组蛋白可以被乙酰化、磷酸化、甲基化和泛素化修饰。这些修饰会改变染色质的空间结构,从而在基因转录调控、染色体装配等过程中起重要作用。通常,histone H2B的Lys5,Lys12和Lys15会发生乙酰化修饰。Histone H3的Lys9,Lys14,Lys18和Lys23会发生乙酰化修饰。Histone H3的Ser10,Ser28和Thr11都会发生磷酸化修饰。Histone H3的这些磷酸化和有丝分裂或减数分裂过程中的染色质浓缩密切相关。Histone H3 Thr3的磷酸化在很多物种中都非常保守,可以被激酶haspin所催化。Histone H3的Thr3磷酸化发生在有丝分裂早期(prophase),在有丝分裂的晚期(anaphase)则被去磷酸化。Histone H3和H4是甲基化修饰的主要组蛋白,哺乳动物细胞中histone H3和H4是高度甲基化的。组蛋白可以被单、双或三甲基化(mono-,di-,and tri-methylated),和基因转录调控和染色体装配密切相关。Histone H3的Lys4二或三甲基化和很多基因的转录激活相关。Histone H3的Lys4二甲基化和三甲基化和基因的转录激活密切相关。尽管Lys4二甲基化的histone H3也在非转录激活区被检测到,Lys4二甲基化和三甲基化的histone H3在异染色质中是检测不到的。Histone H3的Lys9单甲基化和二甲基化和基因沉默和异染色质装配有关,而Lys9三甲基化的Histone H3在异染色质的pericentric domain区域富集。

Histone H3在其氨基端有一个较长的N terminal tail,在核小体的装配过程中起关键作用。Histone H3是各种histone中修饰程度的,在表观遗传(epigenetics)中起重要作用。Histone H3包括H3A1、H3A2和H3A3。人的hitone H3由近15个基因分别单独编码。Histone H3 Ser10的磷酸化是有丝分裂起始的关键事件,常被用作细胞是否处于有丝分裂的marker。Aurora-A和Aurora-B可以在体外或体内磷酸化histone H3的Ser10。Histone H3 Ser10的磷酸化还和一些立早期基因如c-jun、c-fos和c-myc的诱导有关。PKA、Rsk-2和Msk-1都和histone H3的磷酸化密切相关。

产品组份:
Phospho-Histone H3(Ser10)抗体————20μl
Western一抗稀释液————20ml

抗体参数:
免疫原物种:人
免疫原:经过适当修饰的人工合成的含磷酸化Ser10的人Histone H3一段多肽(aa7-20)
克隆性:单克隆
宿主:小鼠
用途:WB,IF,IHC
交叉反应性:人,c线虫
同种型:IgG
Histone H3分子量:~17kD
推荐稀释比例:WB(1:1000-5000),IF(1:500),IHC(1:500)

注意事项:
1. 在Western实验后,请注意回收稀释的抗体。回收的抗体在进行Western实验时至少可以重复使用10次。稀释后的抗体,包括已经使用过的稀释抗体,4℃保存。
2. 回收后重复使用的抗体,使用方法同新鲜稀释的抗体。如果在重复使用过程中发现抗体出现轻微混浊现象,可以10000g离心1-3分钟,取上清用于后续检测。如果回收的抗体出现明显的絮状物或长霉长菌等情况,则可以考虑废弃该抗体。

储存条件:-20℃,有效期一年。


N端BFP标签融合蛋白质粒(蓝色荧光蛋白)厂家
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