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小鼠结缔组织细胞胸苷激酶缺陷株；L-M(TK-)品Pai

产品信息
小鼠结缔组织细胞胸苷激酶缺陷株；L-M(TK-)品牌对于悬浮细胞传代方法：方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
注意事项：
1. 收到 小鼠结缔组织细胞胸苷激酶缺陷株；L-M(TK-)品Pai后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们。
2. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
细胞名称 小鼠结缔组织细胞胸苷激酶缺陷株；L-M(TK-)品Pai
形态特性 成纤维细胞样
生长特性 贴壁生长
特征特性 L-M (TK-)细胞是L-M（ATCC CCL-1.2 ）细胞系的衍生株，具有抗5-溴脱氧尿核苷（5-bromo-2-deoxyuridine,BUdR）、缺乏胸腺嘧啶核苷激酶（thymidine kinase mutant）的特性，广泛用于遗传学、生物化学基础研究。也可用在体细胞杂交、基因转移等实验研究中。
培养条件 DMEM-H: Dulbecco＇s Modified Eagle＇s Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS
传代方法 1:3传代,2-3天传一代
传代情况 C36
冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS
小鼠结缔组织细胞胸苷激酶缺陷株；L-M(TK-)品Pai【培养指南】
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
小鼠结缔组织细胞胸苷激酶缺陷株；L-M(TK-)品Pai【细胞冻存】
待细胞生长状态良好时，可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液(防止细胞吸走)，加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
小鼠结缔组织细胞胸苷激酶缺陷株；L-M(TK-)品Pai【复苏的原则】
快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货，全国统一价格，本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞培养的优点：
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。

小鼠结缔组织细胞胸苷激酶缺陷株；L-M(TK-)品Pai实验报告：
一、分离与培养：
    1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；
    2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
    3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；
    4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
    5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
    1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；
    2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
    3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
    4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗（Abbioscience公司），然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
    5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗（嘉美生物公司）， 37℃条件下放置1h；
    6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜(Leica公司)下观察图像并拍照。
CIN-1I培养基shēng huà shì jì容量：50克
10605-21-7多菌灵;棉萎灵;棉萎丹;本并咪唑44;2-本并咪唑基甲酯;2-(甲氧基碳酰基)本并咪唑CarbendaziM;1H-BenziMidazol-2-ylcarbaMic acid metxyl ester;2-BenziMidazolecarbaMic acid metxyl ester;2-(metxoxycarbonylaMino)benziMidazole;metxyl-2-benziMidazolecarbaMate;Carbendazole;BMC;MBC
metxyl 4,5-dimetxylthiopxene-2-carboxylate 168850-69-9
对苯二二辛酯 Dioctyl terephthalate,≥96% 6422-86-2 500ML 通用试剂
脱氧核糖核酸(鱼精)/DNA(鱼精)/DNA BR，85% 1克 国产/进口
黄芩苷元，英文名或英文缩写：Baicalein，级别：AR，99%，规格：100克
(棕榈酸)
TRYPSININHIBITOR,SOYBEAN胰蛋白酶YZ剂,大豆试剂级
流醋铋 BisMuth sulfctq;BisMuthous sulfctq 7787-68-0
Acriflavine黄素100毫克AR，99%
甲氧基红霉素，英文名或英文缩写：Clarithromycin，级别：USP级，930u/mg，规格：500毫克
9024-13-9软骨素酶 (-20℃)CHONDROITINASE ABC
TTE,20XLIQUIDCONCENTRATETTE浓缩液超纯级透明无色液体RTsigma
N-Boc-L-苯丙醛 N-Boc-L-phenylalaninal,97% 72155-45-4 250MG 通用试剂
硫化锌/闪锌矿/Zinc sulfide 荧光纯，95% 500克 国产/进口
Ironbacteriamedium
P小鼠结缔组织细胞胸苷激酶缺陷株；L-M(TK-)品PaiBS，(1X) pH7.2 20012-027 500ml incubation media PBS，(1X) pH7.2 20012-027 500ml
荚膜红细菌 支/瓶
MRS琼脂平板(9cm)用于食品中乳酸菌总数测定
沙氏琼脂培养基(SDA) 250g 用途：用于医药工业洁净室(区)沉降菌的测试(GB/T
TSN琼脂250g用于产气荚膜梭菌的平板计数
肠球菌琼脂(胆盐-七叶苷-叠氮琼脂) Enterococcus Agar(Bile Esculin Azide Agar) 用于肠球菌和肠道致病菌的分离培养
水杨素 1g 进口分装，与HB116配套使用
麦芽汁肉汤250g/瓶含0.6%麦芽浸粉，不含氯霉素，用于霉菌和酵母菌的培养incubationmedia麦芽汁肉汤250g/瓶含0.6%麦芽浸粉，不含氯霉素，用于霉菌和酵母菌的培养
CVTAgar
 

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