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人横纹肌肉瘤细胞；TE671 Subline No.2说明书

产品信息
人横纹肌肉瘤细胞；TE671 Subline No.2说明书对于悬浮细胞传代方法：方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
细胞名称 人横纹肌肉瘤细胞；TE671 Subline No.2说明书
形态特性 上皮样
生长特性 贴壁生长
特征特性 该细胞表达N型乙酰胆碱和外周型苯二氮?的受体。
培养条件 DMEM-H: Dulbecco＇s Modified Eagle＇s Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS
传代方法 1:3~1:6传代，2~3天换液1次。
传代情况 C4
冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS
【培养指南】
人横纹肌肉瘤细胞；TE671 Subline No.2说明书对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
【细胞冻存】
人横纹肌肉瘤细胞；TE671 Subline No.2说明书待细胞生长状态良好时，可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液(防止细胞吸走)，加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
【复苏的原则】
人横纹肌肉瘤细胞；TE671 Subline No.2说明书快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货，全国统一价格，本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞培养的优点：
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。

实验报告：
一、人横纹肌肉瘤细胞；TE671 Subline No.2说明书分离与培养：
    1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；
    2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
    3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；
    4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
    5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
    1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；
    2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
    3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
    4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗（Abbioscience公司），然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
    5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗（嘉美生物公司）， 37℃条件下放置1h；
    6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜(Leica公司)下观察图像并拍照。
  3-吗啉-2-羟基丙磺酸钠，英文名或英文缩写：MOPSO wo7ium salt，级别：质谱级，规格：100克
硅同　SF-96 Siliconq SF 96
2,7-Dixy7noxyfluorene 5043-54-9
水杨酰苯胺 Salicylanilide,98% 87-17-2 25G 通用试剂
DL3000 DNA Marker 片段：100、250、500、750、1000、1500、2000、2500、3000bp 50次/300ul/支 国产/进口
聚二，英文名或英文缩写：PEG-diamine，级别：BR，90%，规格：10克
7440-38-2砷标准溶液Arsenic
橙，英文名或英文缩写：Orange IV，级别：超纯，99%，规格：5克
1-溴-3,5-二甲氧基苯 1-Bromo-3,5-dimethoxybenzene,97% 20469-65-2 5G 通用试剂
聚乙二醇20000/聚氧20000/聚乙二醇20M/PEG20000 AR 250克 国产/进口
丽丝胺罗丹明B100u保存：-20℃
(鱼精蛋白)
盐酸吲哚酚，英文名或英文缩写：Indoxyl acetate，级别：CP，规格：25克
5-基胞嘧啶;5-基胞嗪;4-安基-2-羌基-5-基嘧啶 5-Mqthylcytosinq;4(6)-cMino-2-xy7noxy-5-MqthylpyriMidinq;4-cMino-5-Mqthyl-2(1H)pyriMidinonq 224-01-8
总胆红素、直接胆红素测试盒shēng huà shì jì容量：1个
人横纹肌肉瘤细胞；TE671 Subline No.2说明书营养肉汤培养基(ZG药典)250g用于药品中一般细菌的增菌培养
Hugh-Leifon葡萄糖肉汤(HLGB) 250(g) incubation media Hugh-Leifon葡萄糖肉汤(HLGB) 250(g)
胰酶牛肉汤 胰酶牛肉汤 1万毫升/袋 制造快疫疫苗用
碱性胆盐琼脂250用于分离霍乱弧菌incubationmedia碱性胆盐琼脂250用于分离霍乱弧菌
盐肉汤 250g 用于蜡样芽孢杆菌盐还原试验(SN标准)
血琼脂培养基基础24060250g加入脱纤维羊血或兔血，制成血琼脂培养基，用于营养要求较高的细菌的培养及溶血试验(GB4789..
卡里-布莱尔转运培养基 (CM0519) Oxoid incubation media 卡里-布莱尔转运培养基 (CM0519) Oxoid
苏云金芽孢杆菌戈尔斯德变种 模式菌株 支/瓶
m-TEC琼脂250g用于水中耐热细菌滤膜计数
MH肉汤(MHB) 250g 用于抗生素敏感试验  
 注意事项：
1. 收到人横纹肌肉瘤细胞；TE671 Subline No.2说明书 后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们。
2. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

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