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EB病毒转化的人B淋巴细胞；KMY0928说明书

产品信息
EB病毒转化的人B淋巴细胞；KMY0928说明书对于悬浮细胞传代方法：方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
注意事项：
1. 收到EB病毒转化的人B淋巴细胞；KMY0928说明书后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们。
2. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
细胞名称  EB病毒转化的人B淋巴细胞；KMY0928说明书
形态特性 淋巴母细胞样
生长特性 悬浮生长
特征特性 该细胞系来源于一成年男性的外周血。2009年由中科院昆明细胞库通过EB病毒转化的方法建立。
培养条件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 15%NBS
传代方法 1:2传代；5-6天一次
传代情况 P2
冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS
【培养指南】
EB病毒转化的人B淋巴细胞；KMY0928说明书对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
【细胞冻存】
EB病毒转化的人B淋巴细胞；KMY0928说明书待细胞生长状态良好时，可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液(防止细胞吸走)，加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
【复苏的原则】
EB病毒转化的人B淋巴细胞；KMY0928说明书快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货，全国统一价格，本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞培养的优点：
1.EB病毒转化的人B淋巴细胞；KMY0928说明书研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。

实验报告：
一、EB病毒转化的人B淋巴细胞；KMY0928说明书分离与培养：
    1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；
    2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
    3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；
    4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
    5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
    1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；
    2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
    3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
    4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗（Abbioscience公司），然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
    5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗（嘉美生物公司）， 37℃条件下放置1h；
    6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜(Leica公司)下观察图像并拍照。
 ase
营养琼脂斜面 Nutrient agar slant 用于细菌的纯化培养
酵母浸粉 Yeast Extract Powder 250 培养基原材料，提供细菌生长所需的维生素B族
SC琼脂基础250g/瓶用于产气荚膜梭菌的计数和培养(ISO)，需添加2及2incubationmediaSC琼脂基础250g/瓶用于产气荚膜梭菌的计数和培养(ISO)，需添加2及21001
MethylRedIndicatorBox  
  L-天门冬酸钙100克
1779-49-3甲基三本溴化磷metxyltripxenylphosphonium bromide
2-Deoxy-D-glucose2-去氧-D-葡萄糖100毫克BR，85%
5-甲基胞嘧啶 5-Methylcytosine (HPLC,≥98%) 554-01-8 50MG 通用试剂
DL-a-炳安醋;DL-初油安基醋;DL-α-丝析安醋 DL-α-clcninq;dl-2-cMino propcnic ccid;dl-α-cMino propcnic ccid;(±)-2-cMinopropionic ccid 1930/7/7
奈酚AS-TR乙酸酯100毫克保存：-20℃
1072-97-52-基-5-溴2-Amino-5-bromopyridine
三氧化钼shēng huà shì jì容量：500毫升
2,6-二录本安 2,6-Dichlorocnilinq 608-31-1
二甲乙二烯咯三酸，英文名或英文缩写：Domoic acid，级别：2.5N，规格：1克
培养皿刷1KU2～8℃
Casein 25g/100g/250g/1kg Sigma C5890
胰酪胨大豆羊血琼脂基础shēng huà shì jì容量：RT1米
减式醋铝 cluminum diccqtctq xy7noxidq 14-03-0
δ-酚 D-DqLTc-TOCOPHqROL 119-13-1
V-P半固体琼脂250g生化培养基，用于细菌V-P试验(SN标准)
Actinomycetesculturemedium
EB病毒转化的人B淋巴细胞；KMY0928说明书茜素-β-半乳糖苷琼脂 Aliz-gal Agar 250 用于食品、饮料和饮用水中大肠菌群快速检测和计数(GB/T)
Miller培养基250g/瓶用于植物组织培养incubationmediaMiller培养基250g/瓶用于植物组织培养
含100mlGN增菌液均质袋 10个/包 用于志贺氏菌前增菌培养
解磷细菌培养基250g用于解磷细菌的分离培养
营养肉汤 非苛养要求微生物的普通培养 500g incubation media 营养肉汤 非苛养要求微生物的普通培养 500g
蛾微杆菌 支/瓶
Baird-Parker琼脂平板(9cm)用于金黄色葡萄球菌的选择性分离培养
YM11琼脂 250g 滤膜法用于霉菌,酵母菌的分离培养(NEOGEN)  
 

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