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血细胞分离技术(一)

采血  
(一)材料与试剂
1.抗凝剂
(2)乙二胺四乙酸(EDTA):是一种螯合剂。用生理盐水配制成4%的溶液备用。
 枸橼酸钠(Na3C6H5O7·5H2O)      0.80g
 葡萄糖                            2.05g
 H2O        加至                  100.00ml
阿氏液中既含有枸橼酸钠抗凝剂,又含有细胞生存的营养,所以它既可做抗凝剂,又可做血细胞的保存液。
3.采血容器  注射器或三角瓶等。

1.采血法  各种动物采血方法不一。马、牛、羊等大动物一般从颈静脉采血,猪从颈静脉、前腔静脉或耳静脉采血,家禽由翼下静脉或心脏采血,兔由心脏或耳静脉采血,犬由颈静脉或四肢静脉采血,豚鼠由心脏采血,小白鼠则可断尾或剪断腋下血管或剪断眼球采血。
(1)肝素抗凝:采血时,使每ml血液含15U~20U肝素即可。计算采集的血液量,按1 000U/ml的量加入肝素,直接放入采血容器中,采血时,边采血边轻轻摇动,使抗凝剂和血液混匀。对于采少量的血液或小动物采血,可直接用注射器抽取一定量的肝素液,再采血直接抗凝。
(3)玻璃珠法:预先将适量的玻璃珠(根据采血量多少而定)清洗后,装入采血容器中,灭菌后备用。采血过程中,边采边摇采血瓶,以使小玻璃珠在血液中滚动,以机械地除去纤维蛋白,使血液不能凝固。本法虽较麻烦,但对淋巴细胞的活性影响最小,且可减少血小板的混杂。



2.3%明胶液  取明胶3g,溶于0.9%灭菌盐水100ml中,114.3℃灭菌10min,冷却后4℃冰箱保存。临用时,37℃预热10min。

1.采血抗凝,即为红细胞。由于红细胞与白细胞的比例相差悬殊,一般白细胞混杂在其中,忽略不计。
3.如需储藏备用,则以阿氏液做抗凝剂采血,混匀后置4℃冰箱保存,可保存2周,其活性尚可。
淋巴细胞的分离技术
(一)材料与试剂
(1)聚蔗糖—泛影葡胺液:聚蔗糖(polysucrose solution),商品名Ficoll,分子量400 000,多配制成40±1%(W/V)水溶液,也有干粉出售。应用时,用蒸馏水配制9%溶液。泛影葡胺溶液(Meglumini diatrizoici),商品名Vrografin,结构式为3,5—二乙酰氨基2,4,6三碘苯甲酸1—去氧—甲氨基山梨醇。含量为60%或75%,每安瓶为20ml装,常用于人的脏器造影。应用时,取60%泛影葡胺原液20ml,加双蒸馏水15.38ml,即为33.9%泛影葡胺。
1.077±0.001聚蔗糖—泛影葡胺的配制:
33.9%泛影葡胺液            10份
如要配制不同比例的分层液,可按下列公式计算:
(2)泛影葡胺—右旋糖酐(dextran)液
 60%右旋糖酐液               12.5份


2016-07-27
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