细胞分离纯化技术

Percoll不连续密度梯度沉淀法分离纯化淋巴细胞和淋巴母细胞

实验方法原理	Percoll是一种包有乙烯吡咯烷酮的硅胶颗粒。渗透压很低（<20 mosm/kg H2O），粘度也很小，可形成高达1.3 g/ml密度，采用预先形成的密度梯度时可在低离心力（200～1000 g）于数分至数十分钟内达到满意的细胞分离结果。由于Percoll扩散常数低，所形成的梯度十分稳定。此外，Percoll不穿透生物膜，对细胞无毒害，因此广泛用于分离细胞、亚细胞成分、细菌及病毒，还可将受损细胞及其碎片与完好的活细胞分离。
实验材料	Percoll
试剂、试剂盒	PBS血清
仪器、耗材	试管注射器离心机
实验步骤	1. 不同浓度（密度）Percoll溶液的制备先用9 份Percoll与1 份8.5 ％ NaCl或1.5 MPBS混合达到生理性渗透压，然后用生理溶液（0.85 ％ NaCl或0.15 M PBS）稀释到所需浓度。比重（g/ml）　　1.090 1.077 1.067 1.056 1.043 1.031 　　　　　展开
其他	一、分离纯化细胞举例　　　　人不同血细胞的漂浮密度细　胞　　　漂浮密度　粒细胞　　　嗜中性　　 1.080-1.085　　单核细胞　 1.050-1.066 淋巴细胞　　 1.052-1.077 T淋巴细胞　 1.065-1.077 自然杀伤细胞 1.050-1.070　　　展

2016-04-05