PCR扩增反应三部曲以及DNA（靶序列）的制备的步骤

聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction PCR)是一种体外扩增特异性DNA片段的技术。它可以在体外特异地对目的基因进行大量扩增，其巧妙之处在预先设计合成二段分别与待测目的基因二端互补的引物，以起到指向定点的作用；再借助于DNA聚合酶催化的若干次扩增反应后，即可使特定的基因片段成百万倍的扩增。扩增反应分三步：
②褪火：当温度突然降低时由于模板分子结构较引物要复杂得多，而且反应体系中引物DNA量大大多于模板DNA，使引物和其互补的模板在局部形成杂交链，而模板DNA双链之间互补的机会较少。
以引物为起始点，从5′→3′催化的DNA链延伸反应。
操作步骤
进行PCR扩增反应的模板可以是人体组织细胞的染色体DNA，微生物的DNA，或是由mRNA反转录而成的cDNA等。本实验用小鼠肝脏制备染色体DNA作为PCR扩增的模板。
2. 冰浴匀浆。
4. 加入蛋白酶k至终末浓度为100μg/ml。
6. 加入75μl 8M KAC，混匀。
8. 加入750μl氯仿。
10. 加入750μl无水乙醇，充分混匀，-20℃静置30分钟。
12. 将DNA沉淀团块溶于100μl TE缓冲液，加RNA酶1μl，在37℃水浴放置30分钟。
14. 取上清，加入1/10体积的NaAc(pH4.8)和2倍体积的无水乙醇，混匀。
16. 取1μl样品用500μl双蒸水稀释，在260nm和280nm处测定吸光度。鉴定样品纯度并计算其含量。