双荧光素酶报告基因构建及检测服务

双荧光素酶报告基因构建及检测服务服务项目简介

      报告基因是现代分子生物学研究领域中用于分析结构基因旁侧区域潜在的顺式元件(如启动子、增强子和沉默子等)和反式作用因子相互作用关系的一种重要工具，在解析基因时空表达调控的内在规律中发挥着重要作用，它具有便捷、可靠、灵敏度高和适用于大规模检测等优点。

      生兴生物提供报告基因检测服务，采用荧光素酶报告基因检测系统，以荧光素(luciferin)为底物来检测萤火虫荧光素酶(firefly luciferase)活性。该系统的检测原理是，荧光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin，在luciferin氧化的过程中，会发出生物荧光(bioluminescence)，然后可以通过荧光测定仪也称化学发光仪(luminometer)或液闪测定仪测定luciferin氧化过程中释放的生物荧光，荧光闪烁总数与样品中存在荧光素酶的活性成正比。

双荧光素酶报告基因构建及检测服务服务内容

      把感兴趣的基因转录的调控元件克隆在luciferase的上游或其他适当的地方，构建成报告基因质粒。然后转染细胞，适当刺激或处理后裂解细胞，测定荧光素酶活性。通过荧光素酶活性的高低判断刺激前后或不同刺激对感兴趣的调控元件的影响。荧光素酶催化luciferin发光的Z强发光波长为560 nm。

实验步骤

1. 分析并预测启动子区可能的转录因子结合位点。
2. 构建含调控元件序列的荧光素梅报告基因载体。
3. 筛选阳性克隆，测序。
4. 扩增转录因子质粒，提纯备用。同时准备相应的空载质粒对照，提纯备用。
5. 培养目的细胞，并接种于孔板中，使生长达到80%汇合度。
6. 将报告基因质粒与转录因子表达质粒共转染细胞。
7. 提取蛋白并用于荧光素酶检测。
8. 加入底物，测定荧光素酶的活性。
9. 计算相对荧光强度，并与空载对照比较。
10. 实验报告。

应用领域

1. 荧光素酶基因标记基因
2. 荧光素酶基因标记细胞
3. 荧光素酶基因标记微生物
4. 活体生物体内成像
5. 药物筛选
6. 双报告基因系统