Protein Silver Stain Kit 蛋白质银染试剂盒

Protein Silver Stain Kit 蛋白质银染试剂盒

产品信息

产品描述

生化实验中蛋白质常通过凝胶电泳的方式分离后需经过染色才能肉眼可见，染色方法有两种：1）染料染色法；2）金属染色法。前者主要是考马斯亮蓝染色法，后者主要采用银染法。前者操比较简单，省时；但是后者具有较高的检测灵敏性，可检测到10-100 ng蛋白质，比考马斯亮蓝染色法灵敏100多倍。本试剂盒可用于聚丙烯酰胺凝胶和琼脂糖凝胶中的微量蛋白质的检测。

产品组分

运输和保存方法

冰袋运输。

4℃保存，1年有效。银溶液和溶液II需要避光保存。

使用方法

以10cm²凝胶为例，不同凝胶大小可按比例调整氧化液、染色液和脱色液的体积。

所有浓缩液使用前用去离子水稀释至1×工作液后使用，水平摇床的转速设置在55rpm左右。

1. 固定：按体积比，冰醋酸：无水乙醇：去离子水=1：4：5配制100ml固定液，将电泳后的凝胶放入固定液中，室温条件置于水平摇床上，缓慢震荡固定120min；
2. 洗涤：用去离子水漂洗30min，期间更换3~5次。
3. 增敏：用去离子水分别稀释5×敏化底物液，以及5×溶液I至1×工作液。取65.5ml 1×敏化底物液加入4ml 1×溶液I、500μl 溶液II、30ml 无水乙醇混匀即得到增敏液。然后将凝胶放入100ml增敏液中，室温条件置于摇床上摇动60min；
4. 洗涤：用用去离子水漂洗30min，期间更换3~5次。
5. 银染：用去离子水稀释10×银（Ag）溶液至1×工作液。取10ml 1×银溶液加入40μl 溶液III，加入去离子水补足体积至100ml即得到银染液。然后将凝胶放入100ml银染液中，室温条件置于摇床上摇动60min；
6. 洗涤：用去离子水漂洗银染后的凝胶4次，每次1min；
7. 显色：用去离子水稀释10×显影底物液至1X工作液。取40ml 1X 显影底物液加入40μl 溶液III、3μl 1×溶液I，加入去离子水补足体积至100ml即得到显色液。然后将凝胶放入100ml显色液中，室温条件置于摇床上摇动6min。注意：显色的时间可控制在1-15min，直至出现比较理想的预期蛋白条带。
8. 终止：用去离子水稀释10×终止液至1X终止液。取100ml 1X终止液，将显色后的凝胶放入其中，室温条件置于摇床上摇动，反应40min；
9. 洗涤：用100ml去离子水洗30min，期间更换2次。
10. 照相：保存显色出的蛋白质条带并记录。

注意事项

1. 显色过程较快，要注意把握时间，避免染色过度。
2. 所用器皿要很洁净，不要用手直接接触，以免杂蛋白污染。
3. 清洗用水尽量用高纯度去离子水如ddH₂O，可以减少背景着色。
4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。